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164 CHAPITRE 4. PLASTICITÉ PHÉNOTYPIQUE DE L’HC DE C. MAENAS TAB. 4.5 – Changements protéiques avant et après stabulation. Lorsque la proportion d’hexamère à 337 nm est supérieure à celle à 280 nm (chez quelques crabes), la proportion d’hexamère nonfonctionnelle est considérée comme nulle. Pont Eon Pont de la Corde Avant stab. Après stab. Avant stab. Après stab. protéines ± d.s. (mg/ml) 89,6 ± 17,3 39,9 ± 21,9 36 ± 37,8 23,3 ± 4,9 proportions d’hexamère n f ± d.s. 22,4 ± 8,2 13,4 ± 11,7 0,2 ± 0,4 2,3 ± 3,5 Nb crabes avec bande * / Nb total 7/8 5/6 1/5 4/4 Profils PAGE Les protéines totales des échantillons d’hémolymphe prélevés ont été dosées : avant stabulation, les individus capturés en amont ont une concentration en protéines supérieure à celle des individus pris en aval. Après acclimatation, les teneurs en protéine sont faibles dans les deux groupes. La composition en sous-unités des crabes a été analysée en PAGE dénaturant et natif (figure 4.17). Les profils des crabes provenant des deux sites sont similaires en gel dénaturant avec 3 bandes bien visibles d’une masse d’environ 75 kDa. En gel natif, trois bandes migrant rapidement sont observées dans tous les échantillons et une bande est observée chez 7 individus sur 8 de Pont Eon avant stabulation et 1 sur 5 du Pont de la Corde. Après stabulation, cette bande est observée chez les 4 individus restant du Pont de la Corde. La présence de cette bande est corrélée avec la présence d’hexamère non-fonctionnel et constitue probablement ce complexe. En gel dénaturant après stabulation, la bande la plus lente est plus importante chez les individus présentant une forte bande * en gel natif et doit correspondre à cette sous-unité. Profils PAGE des complexes purifiés Afin de vérifier si la bande * est bien reliée à la fraction hexamérique, les complexes des échantillons prélevés après stabulation ont été purifiés par SEC et les fractions récupérées analysées en PAGE (figure 4.18). La bande * est présente dans la fraction hexamèrique uniquement ; l’intensité de la bande * est corrélée à l’abondance d’hexamère non-fonctionnel dans l’hémolymphe (gels natifs). Cette bande * est également visible sur les gels dénaturants au niveau de la bande la plus lente. En dehors de cette bande, les profils observés après stabulation pour les différents complexes sont très similaires pour les crabes des deux sites.
Avant stabulation Après stabulation Dénaturant Natif FIG. 4.17 – Profils PAGE dénaturant et natif de crabes estuariens 4.6. ETUDE 3 : ÉTUDE D’UNE POPULATION NATURELLE ESTUARIENNE 165
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THESE DE DOCTORAT DE L’UNIVERSITE
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(a) FIG. 1.6 - Fonctionnement d’u
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