maenas (intertidal zone) and Segonzacia mesatlantica - Station ...
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148 CHAPITRE 4. PLASTICITÉ PHÉNOTYPIQUE DE L’HC DE C. MAENAS Après stabulation Avant stabulation FIG. 4.6 – PAGE natif des échantillons provenant de crabes acclimatés à différentes salinités. Trois échantillons représentatifs de chaque condition sont présentés. Les accolades désignent les complexes non-dissociés et les 3 flèches du bas les sous-unités séparées en gel natif. Composition en sous-unités Une analyse de la composition en sous-unités par PAGE natif ne révèle pas non-plus de variations entre les échantillons prélevés avant et après l’acclimatation de 20 jours, quelle que soit la condition considérée. Ces observations sont en accord avec celles réalisées sur les échantillons congelés. Aucun effet de la salinité sur la structure de l’Hc n’a donc été observé dans les conditions expérimentales utilisées. 4.5.3 Résultats expérience b : effet de l’oxygénation L’analyse par gel d’acrylamide ne permet pas de séparer avec une résolution suffisamment bonne les différentes sous-unités. La quantification sur gel est également peu précise et peut être gênée par des migrations différentes d’un gel à l’autre suivant les conditions de polymérisation de l’acrylamide. Afin de réaliser une caractérisation plus précise de la composition en sous-unité et de pouvoir réaliser une quantification relative des sous-unités présentes, des échantillons de dodécamère et d’hexamère purifiés ont été analysés en ESI-MS en conditions dénaturantes. Des échantillons d’hémolymphe totale d’individus acclimatés à différentes conditions ont également été analysés en ESI-MS supramoléculaire afin de caractériser les complexes présents.
4.5. ETUDE 2 : EFFET DE LA SALINITÉ ET DE L’OXYGÉNATION 149 TAB. 4.2 – Données obtenues à différentes oxygénations chez Carcinus maenas. t0, avant acclimatation, t1, après acclimatation. Normoxie (n=8) Ox. Variable (n=4) Protéines t0 (mg/ml) moy ± d.s. 67,1 ± 21,7 79,3 ± 23,4 Protéines t1 (mg/ml) moy ± d.s. 53,3 ± 18,4 75,6 ± 28,3 ∆([prot]) moy ± d.s. -17 % ± 22 -6 % ± 10 % dodécamère t0 ± d.s. 87 ± 3,8 87,5 ± 2,8 % dodécamère t1 ± d.s. 88,7 ± 3,2 88,4 ± 2,7 ∆(prop.dodec) moy ± d.s. 2 % ± 3 1 % ± 4 Proportions des complexes Après 10 jours d’acclimatation à une oxygénation variable (hypoxie avec retours brusques à la normoxie) ou en normoxie, à une salinité constante (normosalinité), la plupart des crabes présentent une diminution de la concentration de protéines dans l’hémolymphe. Les conditions d’oxygénation n’ont d’effet ni sur la concentration absolue en protéines après acclimatation (R 2 =0,14 ; p-value=0,10), ni sur les variations relatives de concentrations en protéines (R 2 =0,08 ; p-value=0,49). Les conditions d’acclimatation n’ont pas d’effet sur les proportions des complexes observées,que ce soit en valeurs absolues après acclimatation (R 2 =0 ; p-value=0,87) ou en variations relatives (R 2 =0,02 ; p-value=0,70). Les crabes présentent environ 88 % de dodécamère avant et après acclimatation avec des variations relatives très faibles pour chacun des crabes. Dans cette expérience, certains crabes présentent encore les complexes hexamériques non-fonctionnels ; ces crabes possèdent ce complexe avant et après acclimatation, et l’acclimatation ne semble pas avoir d’effet sur la présence de ce complexe. Composition en sous-unités L’hémolymphe native ainsi que les complexes purifiés de 4 crabes ont été analysés en ESI-MS, avant et après acclimatation. Les hauteurs des pics ont été normalisées de manière à ce que leur somme soit égale à 1 pour chaque spectre ; elles permettent de quantifier les abondances relatives des sous-unités et de les comparer d’un spectre à l’autre (figure 4.11). Il est à noter que cette quantification permet une comparaison relative d’un échantillon à l’autre et est donc utilisable dans les analyses statistiques, mais qu’elle ne reflète pas forcément les abondances relatives réelles présentes dans l’échantillon car les sous-unités peuvent avoir un comportement différent lors de l’ionisation et être ionisées plus ou moins facilement. Les analyses statistiques sur les compositions en sous-unités sont détaillées dans la partie concernant Segonzacia. Pour tester l’effet de l’acclimatation, on peut utiliser uniquement les échantillons
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Après stabulation<br />
Avant stabulation<br />
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FIG. 4.6 – PAGE natif des échantillons provenant de crabes acclimatés à différentes salinités. Trois<br />
échantillons représentatifs de chaque condition sont présentés. Les accolades désignent les complexes<br />
non-dissociés et les 3 flèches du bas les sous-unités séparées en gel natif.<br />
Composition en sous-unités<br />
Une analyse de la composition en sous-unités par PAGE natif ne révèle pas non-plus de variations<br />
entre les échantillons prélevés avant et après l’acclimatation de 20 jours, quelle que soit la condition<br />
considérée. Ces observations sont en accord avec celles réalisées sur les échantillons congelés.<br />
Aucun effet de la salinité sur la structure de l’Hc n’a donc été observé dans les conditions expérimentales<br />
utilisées.<br />
4.5.3 Résultats expérience b : effet de l’oxygénation<br />
L’analyse par gel d’acrylamide ne permet pas de séparer avec une résolution suffisamment bonne<br />
les différentes sous-unités. La quantification sur gel est également peu précise et peut être gênée par<br />
des migrations différentes d’un gel à l’autre suivant les conditions de polymérisation de l’acrylamide.<br />
Afin de réaliser une caractérisation plus précise de la composition en sous-unité et de pouvoir réaliser<br />
une quantification relative des sous-unités présentes, des échantillons de dodécamère et d’hexamère<br />
purifiés ont été analysés en ESI-MS en conditions dénaturantes. Des échantillons d’hémolymphe<br />
totale d’individus acclimatés à différentes conditions ont également été analysés en ESI-MS supramoléculaire<br />
afin de caractériser les complexes présents.
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