maenas (intertidal zone) and Segonzacia mesatlantica - Station ...

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140 CHAPITRE 4. PLASTICITÉ PHÉNOTYPIQUE DE L’HC DE C. MAENAS 4.3.6 Analyses statistiques Les analyses statistiques ont été réalisées en utilisant principalement les fonctions rdaTest et graph.rdaTest écrites par Pierre Legendre et Sébastien Durand en langage R. La fonction rdaTest permet de réaliser des analyses canoniques de redondance sous forme de MANOVA, en réalisant des tests de signification par permutation ce qui la rend utilisable pour des échantillons de petite taille et ne suivant pas une distribution normale. Elle est présentée dans la partie 5.4.2 et son utilisation est détaillée pour l’analyse des données concernant Segonzacia mesatlantica dans la partie 5.4.3 (page 191). Le cas échéant, deux groupes d’échantillons ont pu être comparés entre eux en utilisant le test non-paramètrique de Wilcoxon-Mann-Whitney. 4.4 Etude n°1 : Expérience préliminaire d’acclimatation à différentes salinités 4.4.1 Démarche expérimentale Des crabes adultes Carcinus maenas capturés sur l’estran à Roscoff ont été acclimatés pendant 3 semaines à différentes conditions de salinité (hyposalinité 1/2 et 3/4, hypersalinité 5/4). Les crabes étaient régulièrement nourris et l’eau était oxygénée par bullage. L’hémolymphe des crabes a été prélevée après acclimatation, centrifugée puis le surnageant a été stocké pendant 1 mois et demi à -80°C. Les différents échantillons ont été décongelés sur glace puis analysés par SEC-MALLS et par gels d’électrophorèse natifs afin de détecter un éventuel changement de structure après acclimatation. 4.4.2 Résultats Profils SEC-MALLS Le profil FPLC de tous les échantillons décongelés, quelle que soit la condition d’acclimatation, est très différent de celui observé sur de l’hémolymphe fraîche : des agrégats ont été formés et une dégradation a eu lieu ; d’autre part un pic supplémentaire S apparaît à la suite du pic d’hexamère (figure 4.1). L’absorbance à 337 nm montre pour les espèces Agr., D, H et S qu’elles sont bien formées d’Hc encore fonctionnelle. Afin de vérifier les masses et l’identité des pics et notamment du pic S, une analyse en MALLS a été réalisée (figure 4.2). Pour l’échantillon présenté, les masses des pics de dodécamère et d’hexamère correspondent bien à l’ordre de grandeur des masses attendues. De manière surprenante, la masse estimée pour le pic S ne correspond pas à des sous-unités isolées mais est très proche de celle estimée pour l’hexamère : ce pic est donc composé d’une fraction hexamérique. De plus, la déconvolution
4.4. ETUDE 1 : EXPÉRIENCE PRÉLIMINAIRE (ACCL. SALINITÉ) 141 en pics gaussiens révèlent un autre composé probablement hexamérique : une déconvolution à 4 pics ne permet pas de reconstituer correctement le signal alors qu’une déconvolution à 5 pics est correcte (figure 4.2a,b). Le pic d’hexamère est alors visiblement constituté de 2 pics proches. Les profils obtenus varient selon les conditions d’acclimatation des crabes : les agrégats et les produits de dissociation sont plus abondants dans les échantillons hypersalins. Une analyse RDA à un facteur (salinité) montre que l’effet de l’acclimatation est statistiquement significatif sur les aires des différents pics à 337 nm (R 2 =0,46 ; p-value=0,009) (figure 4.3). L’abondance des dodécamères et des hexamères classiques est plus importante dans les échantillons hyposalins et le pic supplémentaire et les agrégats sont plus abondants dans les échantillons hypersalins. Composition en sous-unités par PAGE Afin de vérifier si les différences observées au niveau de l’abondance des différents complexes est corrélée avec des composition en sous-unités différentes, les échantillons ont été analysés en PAGE natif (figure 4.4). Trois bandes sont présentes chez tous les individus ; une bande est présente chez un individu de chaque condition. A part cette bande, aucune différence marquée de profil PAGE n’est observée entre les deux conditions d’acclimatation. 4.4.3 Discussion L’hémolymphe décongelée comporte une fraction dodécamèrique et 3 fractions hexamériques de masse proche. Les hexamères présents doivent différer dans leur conformation puisqu’ils éluent à des temps différents, ce qui peut être dû à des rayons hydrodynamiques différents ou des interactions différentes avec la matrice. La salinité d’acclimatation a un effet sur les proportions des complexes. Cet effet peut être direct (changement de la composition en sous-unités chez le crabe) ou indirect (conservation différente d’une même structure pendant la congélation). D’après les profils PAGE, la composition en sousunités ne différe pas d’une condition à l’autre. Il est donc probable que la différence de salinité qui résulte en une osmolarité différente de l’hémolymphe agit sur les proportions des complexes par une conservation différente à -80°C selon la force ionique de l’hémolymphe des crabes. Cette expérience préliminaire ne montre donc pas de changement du profil de sous-unités après 3 semaines d’acclimatation à différentes salinités. Cependant, il est également possible que des sousunités migrent au même endroit sur le gel et que certaines soient ainsi "masquées". L’usage de la spectrométrie de masse dans l’étude suivante permet de résoudre ce problème.
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THESE DE DOCTORAT DE L’UNIVERSITE
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i Résumé / Abstract Réponse adap
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iv SOMMAIRE 4.2 Objectifs de l’é
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