Rapport de Campagne - Station Biologique de Roscoff

COMPTE RENDU DE CAMPAGNE A LA MER SUR UN NAVIRE Ifremer
milieu salin et des échantillons de liquide trophosomal ont été préparés afin d'effectuer des essais
de mise en culture au retour au laboratoire.
5°-Réaction aspartate transcarbamylase in situ et microscopie electronique ( en collaboration avec
Françoise Gaill). Quoique l'aspartate transcarbamylase mise en évidence dans le trophosome
présente des propriétés qui la rapproche des enzymes bactériens cette activité n'a pas pu être
décelée dans les extraits préparés à partir des bactéries isolée lors de la campagne HOT 96. Afin
de tenter d'obtenir des informations sur la localisation cellulaire de cet enzyme j'ai utilisé une
méthode cytochimique que nous avons dejà utilisée avec succès chez d'autres organismes. La
méthode repose sur le fait que la réaction catalysée par l'aspartate transcarbamylase libère une
molécule de phosphate inorganique. En présence d'acétate de plomb soluble ce phosphate
précipite in situ sous forme de sel de plomb insoluble qui ,dense aux électrons , permet par
microscopie électronique de localiser cet enzyme dans la cellule . Pré-fixation, incubation
enzymatique et post-fixation ont été realisées à bord sur des échantillons frais de trophosome.
L'examen en microscopie electronique sera effectué au retour dans le laboratoire de Françoise
Gaill.
6°-Influence de la remise sous pression hydrostatique(en collaboration avec Bruce Shillito).
Afin de tester l'importance du maintient de Riftia dans les conditions de pression hydrostatique
de son environnement naturel, J'ai effectué des échantillonnages et préparations identiques à
celles décrites ci-dessus, sur des Riftia remis sous 250 bars dans l'appareillage IPOCAMP pour
des temps variables, dès leur arrivée à bord. Ceci inclut la préparation du symbiote.
7°-Adaptation de l'aspartate transcarbamylase de Clam (Calyptogena magnifica)?
Aline Fiala dispose d'échantillons de clam ayant été récoltés à des profondeurs variables (depuis
la surface jusqu'à 5000 mètres. Ceci pourrait donc constituer un modèle valide pour l'étude de
l'adaptation enzymatique à la pression. Un essai préliminaire antérieur n'avait pas permis de
détecter cette activité. Nous avons donc cette fois-ci effectuer une préparation des différents
organes de cet organisme afin d'y tester la présence de l'aspartate transcarbamylase pour une
analyse future plus précise et détaillée.
Exploitation à terre
Ce qui sera maintenant fait au laboratoire ( si les échantillons y parviennent sains et saufs)
découle logiquement et directement: de l'exposé qui précède:
Ensemble des dosages enzymatiques sur les différentes préparations effectuées .
Dosage de l'ATCase dans les différents organes de Calyptogena magnifica.
Examen en microscopie electronique des incubations ATCase in situ.
Etude des effets de la pression hydrostatique sur la structure et les propriétés de l'ATCase
présente dans le trophosome de Riftia . Ceci sera réalisé à l'aide de l'appareillage REBECCA
construit au Laboratoire et qui nous permer d'effectuer des mesures de cinétique enzymatique à
l'état stationnaire sous pression
Essais de mise en culture du symbiote de Riftia.
Commentaires
Merci à François pour l'organisation de cette campagne ou rien n'a manqué et à
l'atmosphère particulièrement amicale et coopérative.
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