Rapport de Campagne - Station Biologique de Roscoff

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COMPTE RENDU DE CAMPAGNE A LA MER SUR UN NAVIRE Ifremer H OP E 99 Nom : Prénom : Nom : Prénom : Institution : URM 7 Campagne : HOPE 99 Navire : L'ATALANTE - Submersible: NAUTILE Organisme maître d'oeuvre : URM 7 Chef de mission : F. LALLIER Seconde partie: du 27 avril au 22 mai 1999 ANDERSEN Participants associés : Ann Jean-Yves TOULLEC DE CIAN François LALLIER Marie-Cécile UPMC, Station Biologique de Roscoff Rappel des Objectifs Dans le cadre du programme Symbioses nous étudions le mode de transport du CO2 chez Riftia pachyptila. En particulier, nous cherchons à localiser et à caractériser l'anhydrase carbonique connue au niveau du trophosome et du panache branchial. Pour ce faire, nous avions besoin de ces deux tissus fixés pour des études d'immunolocalisation, ainsi que des expérimentations de physiologie in vivo sur des suspensions cellulaires de ces tissus. Pour compléter l'approche de physiologie cellulaire effectuée directement à bord, nous devions en parallèle collecter et mettre sous azote liquide les tissus du vestimentifère pour une étude biochimique ultérieure et la purification de la(les) anhydrase(s) carboniques mise(s) en évidence. Travaux réalisés Au cours de ce 2ème leg, L'ensemble des différents tissus de Riftia a été fixé selon une dizaine de protocoles différents permettant des études complémentaires caractérisant les tissus par histologie, immunohistochimie, immunolocalisation, ultrastructure et immunogold. Les échantillons utilisés proviennent pour la majorité d'entre eux du site Génésis et ont été récolté au cours des trois premières plongées du 2ème leg (plongée # 1369, 1370 et 1371). Les échantillons de tissus pour l'étude biochimique de leurs constituants et la purification de(s) anhydrase(s) carbonique(s) ont été collectés tout au long du leg et conservés dans l'azote liquide après dissection. La méthodologie de dissociation cellulaire à partir du trophosome et du panache branchial a été mise au point avec la collaboration de Jean-Yves Toullec. Pour la partie reconnaissance des types cellulaires, comptage des cellules et suivi de l'état des cellules selon la technique de dissociation utilisée, nous avons travaillé d'abord sur des animaux non repressurisés. Une fois la phase de dissociation cellulaire maîtrisée, nous avons réalisé des tests biologiques, consistant à mesurer les variations de pH extra- et intracellulaire en fonction des pressions partielles en CO2 imposées aux suspensions cellulaires et de la présence/ absence d'inhibiteurs spécifiques de l'anhydrase carbonique (acétazolamide et prontosil-dextran. Dans ce cas, les animaux utilisés ont été préalablement repressurisés pendant une durée variant de 4 à 24h dans l'enceinte IPOCAMP, à la pression de 260 bars et à une température de 6 à 12°C, conformément aux conditions de vie in situ. HOPE 99 Page 211 RAPPORTS SCIENTIFIQUES

COMPTE RENDU DE CAMPAGNE A LA MER SUR UN NAVIRE Ifremer Dans le but d'une remise en culture des cellules branchiales et trophosomales obtenues, une partie des suspensions a été cryopréservée dans différents milieux de culture et différents cryoprotectants. Enfin, nous avons réalisé en parallèle des isolements de bactéries trophosomales sur gradient de Percoll. Une fraction a été fixée et une autre cryopréservée, à titre de comparaison avec les bactériocytes obtenus, ou pour des expérimentations d'immunolocalisation ou d'immunogold ultérieures. Exploitation à terre • Essais de remise en culture des cellules branchiales, trophosomales et bactériennes à partir des lots cryoconservés. • Mesures de pH intracellulaires et autres paramètres de l'état acide-base des cellules dissociées et dont la mesure de pH extracellulaire a été effectuée directement à bord. Analyse de la spécificité d'action et des effets des inhibiteurs (acétazolamide, prontosildextran et amiloride) sur les cellules. • Coupes et observations en microscopie photonique et électronique des tissus fixés de Riftia pachyptila, pour identifier les types cellulaires du trophosome et de la branchie, par rapport aux suspensions cellulaires obtenues. • Analyse ultrastructurale de l'état physiologique des cellules isolées et expériences d'immunolocalisation et d'immunogold de l'anhydrase carbonique et de l'échangeur anionique Chlore/Bicarbonate, qui lui est souvent associé. • Enfin, études biochimiques de caractérisation et de purification de l'anhydrase carbonique de la branchie et du trophosome sur les échantillons de tissu congelés. Fiche Echantillons Détenteur / équipe : ....ECOPHYSIOLOGIE / LALLIER...................................... Plongée Date Observateur Groupe / Genre espèce Qté Equipement No 1369 30-avr Shillito Riftia pachyptila 10 Panier 1370 1-mai Le Bris Riftia pachyptila 14 Panier 1371 2-mai Briand Riftia pachyptila 7 Panier 1372 3-mai Fiala Riftia pachyptila 3 Panier 1373 4-mai Laulier 1374 5-mai Sarradin Riftia pachyptila 20 Panier 1375 6-mai De Cian Riftia pachyptila 17 Panier 1376 7-mai Cosson Riftia pachyptila 2 Panier 1377 8-mai Rodier Riftia pachyptila 3 Panier 1378 9-mai Hourdez Riftia pachyptila 1 Panier 1379 10-mai Pradillon Riftia pachyptila 6 Panier 1380 11-mai Hervé Riftia pachyptila 5 Panier 1381 12-mai Lallier Riftia pachyptila 3 Panier 1382 13-mai Gaill Riftia pachyptila 1 Panier 1383 14-mai Dixon Riftia pachyptila 3 Panier 1384 15-mai Chausson Riftia pachyptila 6 Panier 1385 16-mai Pond Riftia pachyptila 4 Panier 1386 17-mai Toullec Riftia pachyptila 2 Panier 1387 18-mai Andersen 1388 19-mai Birrien Riftia pachyptila 1 Panier 1389 20-mai Cheynel Riftia pachyptila Panier HOPE 99 Page 212 RAPPORTS SCIENTIFIQUES

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