4 - Bibliothèques de l'Université de Lorraine

éseau peu serré en début de gel permet aux protéines de haut poids
moléculaire de se séparer et un réseau plus serré en fin de gel niche
les protéines de bas poids moléculaire.
- Gel avec gradient exponentiel d'acrylamide qUi sépare mieux les
protéines de poids moléculaire voisin.
En général, on prépare pour chaque patient deux plaques soumises à
des champs d'intensité différente afin d'améliorer la discrimination
spectrine-ankyri ne sur la première et protéines 4,1 a et protéine 4,1
b sur la seconde.
(5) La révélation des protéines
s'effectue par un colorant (ex. bleu de Coosmassie) puis par
décoloration jusqu'à neutralisation du fond.
(6) L'analyse densitométrique s'effectue à
540nm
Elle permet de quantifier chaque bande électrophorétique et dégage
le phénotype des protéines de la membrane érythrocytaire du sujet
testé en déduisant le gène mutant.
Cette technique n'est ni très précise, ni très sensible. Elle permet de
détecter une anomalie chez environ 80 % des patients présentant
une sphérocytose héréditaire.
Elle demande beaucoup de temps, un niveau technique élevé et n'est
disponible que dans un petit nombre de centres.
59