4 - Bibliothèques de l'Université de Lorraine

(1) Extraction des protéines totales de la
membrane érythrocytaire
Après élimination des GB, les érythrocytes sont lysés (lyse ménagée
osmotique et chimique) puis subissent une ultracentrifugation et un
lavage jusqu'à obtenir une membrane blanchâtre (membrane
érythrocytaire).
(2) Un dosage des protéines membranaires
par méthode colorimétrique
(3) Une dissociation des protéines
membranaires
obtenue par adjonction de Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) détergeant
ionique qui déroule les protéines en chaînes polypeptidiques allongées.
Son action est complétée par celle d'un réducteur de pont disulfure
qui sépare les sous-unités des protéines complexes.
(4) Une électrophorèse réalisée sur gel de
polyacrylamide (PAGE)
Il s'agit d'une migration de protéines en fonction de leur poids
moléculaire (PM) sous l'influence d'un champ électrique.
L'acrylamide polymérisé forme un gel en réseau qui permet un
tamissage des protéines. Il existe des gels prêts à l'emploi:
- Gel avec gradient linéaire d'acrylamide qui piège des protéines par
les mailles du réseau en fonction de leur poids moléculaire. Ainsi un
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