4 - Bibliothèques de l'Université de Lorraine

cités ci-dessus mais contenant du Nael et du glycérol. L'osmolarité
est fixe à 290 mi lIiosmoles. Le pH est stable à 6,6.
Le test est réalisé sur du sang frais (moins de 3 H) et se fait en
comparaison d'un échanti lion témoi n.
On met en contact les globules rouges avec la solution spécifique et
après 30 mn d'incubation à température ambiante, on centrifuge
l'ensemble à 2000 tours/mn pendant 7 mn. On mesure la densité
optique du surnageant par spectrophotométrie à 540 nm et on définit
ainsi la première absorbance.
On détermine la deuxième absorbance après adjonction dans le mi lieu
de 2 à 3 gouttes de Triton X 100 et un délai d'attente de 5 mn. On
détermine alors le rapport 10 hémolyse =
1 ère absorbance
x 100
2 ème absorbance
Les valeurs d'un résultat normal sont comprises entre 0 10 et 28,5 10,
le test est pathologique si le résultat est supérieur à 28,5 10. La
technique est reproductible, simple, rapide moins coûteuse que
l'AGLT. Le test est très sensible (100 10) mais il existe des faux
positifs quand il y a élliptocytose, anémie hémolytique autoimmune,
insuffisance rénale chronique, et chez 40 % des femmes enceintes au
troisième trimestre. La spécificité est de 97 10 mais il existe de faux
négatifs chez le nourrisson de moins de 4 mois dus à l'hémoglobine
fœtale et en cas de Bêtathalassémie.
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