4 - Bibliothèques de l'Université de Lorraine
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Après avoir mis les échanti lions en suspension dans des solutions d'osmolarité décroissante, après centrifugation et après 30 mn d'incubation à 20 oC, on mesure le pourcentage d'hémoglobine en solution par la densité optique à 540 nanomètres du surnageant. De nombreuses variances techniques existent portant soit sur la préparation des solutions de NaCl, soit sur l'appréciation de l'hémolyse. Les résultats sont exprimés (3) : - en concentration saline pour laquelle l'hémolyse a commencé (hémolyse initiale). Pour un sujet sain, la valeur normale est de 5 0/00. - en concentration sali ne pour laquelle l'hémolyse est complète (hémolyse totale). Pour un sujet sain, la valeur normale est de 3 0/00' Un autre mode d'expression des résultats obtenus consiste à tracer la courbe d'hémolyse en fonction des concentrations salines. On se réfère aux concentrations responsables d'une hémolyse à 10 10, 50 % et 90 10. On compare aux valeurs du témoin. L'hémolyse à 50 10 se produira pour des solutions plus concentrées, on observera donc une déviation vers la droite de la courbe du patient par rapport à la courbe témoi n. Par ailleurs, il existe une corrélation entre la sévérité des manifestations cliniques et l'augmentation de la fragilité osmotique. (37) Le test peut être négatif ou douteux dans 20 à 30 % des cas dans les formes bénignes de la sphérocytose héréditaire et chez le nouveauné. (38) Chez ce dernier, la sensibilité du test de résistance globulaire osmotique (RGO) avant incubation est diminuée, car les 48
globules rouges fœtaux sont osmotiquement plus résistants que les érythrocytes adultes. Dans ce cas, la sensibilité du test peut être augmentée par la mesure de la RGO après incubation à 37°C pendant 24 H. Quand le sang est en incubation à 37°C, les globules rouges continuent à métaboliser du glucose pour produire l'énergie nécessaire au maintien de leur morphologie. Ces conditions sont moins bien supportées par les sphérocytes (baisse plus rapide de leur surface, augmentation plus rapide de leur volume par hydratation cellulaire). La méthode d'étude de la fragilité osmotique après incubation est la même que décrite précédemment (les conditions d'aseptie rigoureuse sont importantes car la contamination bactérienne augmente la lyse). 1 j l 5:]· 1 1 ~ 49
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érythrocytes adultes.<br />
Dans ce cas, la sensibilité du test peut être augmentée par la mesure<br />
<strong>de</strong> la RGO après incubation à 37°C pendant 24 H.<br />
Quand le sang est en incubation à 37°C, les globules rouges<br />
continuent à métaboliser du glucose pour produire l'énergie<br />
nécessaire au maintien <strong>de</strong> leur morphologie. Ces conditions sont moins<br />
bien supportées par<br />
les sphérocytes (baisse plus rapi<strong>de</strong> <strong>de</strong> leur<br />
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