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H. LES DIFFERENTES METHODES DIAGNOSTIQUES 1. Diagnostic direct du virus - La microscopie optique recherche les inclusions virales à partir de prélèvements de moelle hématopoiétique de radulte, du sang du cordon ombilical ou du foie fœtal. De volumineuses inclusions intranucléaires avec margination de la chromatine sont retrouvées dans les précurseurs érythroides (pronormoblaste géant). (198) Après coloration au Wright Giemsa ou à l'hématoxyline-éosine, aspect cytologique présent dans les infections récentes ou anciennes. - La microscopie électronique visualise l'inclusion intranucléaire (accumulation cristalline de particules virales complètes rondes de 18 à 25 nm). Ceci est uniquement un diagnostic de présomption. (198)(199) 2. Recherche de l'antigène viral L'antigène viral n'est pas toujours retrouvé car la virémie est courte et précède souvent les signes cliniques. Deux méthodes permettent sa mise en évidence: - l'ElectroImmunoMicroscopie (EIM) . 154
- l'ElectroImmunoDiffusion (EID). a) EIM (150) On centrifuge pendant deux heures à 100 000 g le sérum ou le plasma décanté. Le culot est repris dans une solution salée phosphatée tamponnée (PB5) et lavé par deux cycles de centrifugation. On additionne au culot du sérum contenant les anticorps antiparvovirus et après contact on centrifuge. Le culot est alors placé sur une grille, traité par l'acide phosphotungstique à 1,5 /0 et à pH de 6,5, et observé au microscope électronique. Mise en évidence d'agrégat de particules virales, nues de 22 nm de diamètre. b) EID (150)(188) On place sur un côté d'une plaque de gélose le sérum supposé contenir l'antigène viral; de l'autre côté de la plaque, on place des anticorps spéci f iques antiparvovi rus. On applique un champ électrique. Au point de rencontre des antigènes et des anticorps, se forme une ligne de précipitation. La dilution maximale d'antigènes donnant un précipitat permet d'évaluer par référence à des témoins la concentration d'antigènes. Les résultats sont obtenus en 1à 2 H. 155
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