(1986) n°2 - Royal Academy for Overseas Sciences
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Cependant, l’analyse des causes d’èchec montre qu’en se montrant plus sévère<br />
pour la qualité et la quantité de parasites des échantillons sélectionnés, on pourrait<br />
facilement faire monter le pourcentage de réussites à 70 ou 80%.<br />
Le facteur limitant le rendement est bien sûr la qualité de l’examen microscopique<br />
qui décide de la sélection. Cet examen est effectué sur le terrain, il doit être rapide<br />
vu le nombre d’échantillons à examiner et se passe dans une ambiance défavorable<br />
à la concentration des microscopistes qui doivent fournir un diagnostic qualitatif et<br />
quantitatif.<br />
Le test de Rieckman de 24 heures (variantes macro et micro) est valable pour<br />
rechercher la sensibilité de P. falciparum à la chloroquine, à l’amodiaquine, à la<br />
méfloquine, et à la quinine.<br />
Outre le godet ou le tube témoin, le sang parasité est mis en présence de 7 doses<br />
croissantes du produit testé. Pour chacune de ces doses, un pourcentage diffèrent de<br />
maturation en schizontes sera observé et la différence par rapport au godet ou tube<br />
témoin sera une mesure de l'efficacité de la dose considérée. Sept points seront ainsi<br />
définis qui serviront à tracer une droite de régression. Celle-ci rend compte du<br />
pourcentage d’inhibition en fonction du logarithme de la dose. Elle permet de définir<br />
sur le graphique la dose qui inhibe 50% de la croissance, de même que celles qui<br />
provoquent l’inhibition de 90% et 99% de la croissance. La standardisation du<br />
matériel, de la procédure et des conditions d’utilisation des tests rendent comparables<br />
les résultats obtenus en différents endroits du monde.<br />
Plus récemment, Le B r a s & D e l o r o n (1983) ont présenté une nouvelle méthode<br />
de détermination de la sensibilité in vitro qu’ils ont appelée le semi-microtest. Ce test<br />
présente l’avantage de pouvoir être pratiqué sur du sang parasité provenant d’un<br />
patient ou sur des parasites établis en culture. En outre, la densité parasitaire n’est<br />
pas déterminante pour la réussite du test, et les godets étant au préalable siliconés,<br />
le problème de fixation de la méfloquine sur la paroi des godets (un reproche qui<br />
a été fait au microtest classique) est évité. Il est cependant plus lourd à utiliser dans<br />
des enquêtes, car la prise de sang doit être faite à l’aide d’un «vacutainer» et les<br />
globules doivent être centrifugés avant d’être resuspendus dans le milieu de culture.<br />
La maturation a lieu dans les godets d’une plaque «microtiter» comme pour le<br />
microtest de Rieckman. Cependant, la période de maturation peut être prolongée<br />
au-delà de 24 heures, au maximum jusqu’à 48 heures pour obtenir un maximum de<br />
schizontes. Ce test a donné dans les mains de ses auteurs un taux de réussite de 50%<br />
environ.<br />
Il existe également des méthodes in vitro pour tester l’activité de la pyrimètha-<br />
mine, du proguanil, des sulfamidés ou des associations de ces produits ( N g u y e n -<br />
D in h 1985, C o o s e m a n s & N g u y e n - D i n h 1985). Le milieu de culture, légèrement<br />
modifié, est appauvri en folate et en acide paramino-benzoïque et l’incubation est<br />
prolongée jusqu’à 48 heures. L ’effet de ces produits s’exerce principalement sur la<br />
synthèse des acides nucléiques qui a lieu dans la deuxième moitié du cycle. On<br />
mesure donc la multiplication parasitaire après un cycle schizogonique complet. La<br />
lecture de ces tests nécessite une numération des parasites avant et après incubation.