(1986) n°2 - Royal Academy for Overseas Sciences

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15 m l de sang veineux doit être prélevé, ce qui n ’est pas aisém ent réalisable surtout
ch ez les enfants, puis une m icrotechnique (R ieckm an et al. 1978) dans laquelle le
prélèvem ent au doigt de 100 pi de sang dans un tube capillaire suffit pour réaliser
le test.
Ces deux tests sont présentés par l’OMS sous forme de nécessaires complets dans
lesquels le matériel est rassemblé pour leur réalisation (N g u y e n-D inh 1985).
Toutefois, une étuve à 37°C (quel que soit le test utilisé) et un dessiccateur ou
récipient analogue fermant hermétiquement, dans lequel on fait brûler une bougie
(Candle Jar) de manière à enrichir l’atmosphère en C 0 2 (dans le cas du microtest
uniquement), sont indispensables et ne sont évidemment pas fournis dans les «kits».
L’OMS qui distribue ces «kits» récolte les données des différentes régions du monde
et publie annuellement une synthèse des résultats.
L’échantillon d’individus sélectionnés pour les tests est généralement choisi parmi
les enfants un peu plus âgés que pour les tests in vivo (âge scolaire). Les densités
parasitaires qu’ils présentent et l’influence minimisée dans les tests in vitro de
l’immunité protectrice le permettent (W éry et al. 1985).
Ces tests sont basés sur l’inhibition par le médicament testé de la maturation en
schizontes des jeunes trophozoites observés dans le sang périphérique au moment
du prélèvement. Cette maturation doit avoir lieu pendant les 24 heures que le sang
parasité passe dans l’étuve à 37°C. Les tubes ou godets témoins dans lesquels aucun
schizonticide n’a été ajouté permettent de contrôler si cette maturation a eu lieu de
manière satisfaisante. Une numération sélective des schizontes (cellules contenant
plus de deux noyaux) et des parasites restés au stade trophozoite (un seul noyau)
fournit le pourcentage de parasites ayant subi une maturation correcte. Pour qu’un
test soit réussi, il faut que plus de 20% des parasites aient atteint le stade schizonte
dans les godets ou les tubes témoins.
Quelques points importants méritent d’être soulignés pour la réussite de ces
épreuves in vitro :
1 ) Il n’est pas inutile de rappeler que le cycle schizogonique de P. falciparum
dure 48 heures et que les premières divisions du noyau du parasite, l’amenant au
stade de schizonte n’ont lieu que dans le dernier tiers du cycle schizogonique, à
partir de la 36' heure. C ’est la raison pour laquelle il faut rejeter les échantillons de
sang contenant de très jeunes anneaux et ne sélectionner que les prélèvements
contenant des trophozoites à cytoplasme charnu qui ont déjà séjourné depuis plus
de douze heures dans le globule rouge. La sélection d’échantillons contenant de trop
petits anneaux est une des principales causes d’échec.
2) La sélection d’enfants en dehors de tout accès de paludisme permet le choix
de densités parasitaires convenables (5 000 à 40 000/mm3) pour les tests, ce qui
revêt une importance considérable. En effet, si les parasites sont trop rares (moins
de 500/mm3), la lecture du test sera fastidieuse (il faut compter deux cents parasites
dans chaque goutte épaisse pour apprécier le pourcentage de maturation).