Séparation des protéines par électrophorèse sur gel de ...

Rapport Exercice 2 Naomi Anderegg & Atsushi Kamada
Session Protéines Membranaires, 2 ème partie :
Séparation des protéines par électrophorèse sur gel
de polyacrylamide-sodium dodécyl sulfate
Détection du récepteur à la transferrine
1. Principe de cette expérience
Le but de l’expérience est de séparer une protéine donnée, d’un ensemble de
protéines cellulaires afin de savoir si elle est constituée de plusieurs sousunités
ou non.
En premier lieu, il faut préparer un gel de séparation compatible avec la taille
élevée de notre protéine, c’est-à-dire avec une densité relativement faible afin
qu’elle soit convenablement séparée des protéines de masses similaires. Il faut
de plus s’assurer que toutes les protéines aient le même point de départ pour la
migration, c’est pourquoi nous avons démarré la migration dans un gel de
concentration.
En suite, nous devons transférer les protéines séparées sur une membrane de
nitrocellulose afin de pouvoir utiliser des anticorps spécifiques interagissants
avec notre protéine cible. Avant cette étape, nous devons utiliser des protéines
de lait pour que ces anticorps ne puissent pas se lier avec la membrance de
nitrocellulose, mais uniquement avec la protéine visée.
Une fois ces étapes terminées nous ajoutons des anti-anticorps (HRP) qui se
couplent aux anticorps et qui émettent un signal de chimiluminescence
permettant ainsi de visualiser sur un film après révélation, grâce à un réactif
qui convertit ce signal en un signal photo.
- 2 -