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Bases pair 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Figure 43 : Produits obtenus après amplification par les amorces AMY 1V et AMY IR Ligne 1 et 13: ADN standard IDND III. 2: Lactobacillus amylovorus LTH 503, 3: Lactobacillus amylovorus TMW 1.88, 4: Lactobacillus amylovorus TMW 1.88, 5 : Lactobacillus amylophilus, 6: 691(Lysat enzymatique d'ADN), 7 : 691 (Ultrasonat d'ADN), 8: E.coli HB101, 9: ADN E.coli HBI0l(Amyl+), 10 : ADN E.coli HBI0l, 11 : Plasmide E.coli HB101(Amyl+), 12: Plasmide E.coli HB101(Amyl+). Des ADN de souches sans pouvoir amylolytique ont été également testées, certaines de ces souches peuvent donner des fragments d'ADN lorsque la température d'hybridation est basse. C'est le cas des souches Lac/obacillus plan/arum LTH 1.25 et 206. Ces fragments sont de taille beaucoup plus grande que ceux obtenus avec les souches amylase positives. Par ailleurs, lorsqu'on augmente la température d'hybridation de 3°C les souches Lac/obacillus plan/arum LTH 1.25 et 206 ne donnent plus de fragment. Ce résultat nous permet de considérer les amorces AMY 1V et AMY IR comme étant spécifiques pour certains gènes d'amylase. Séquence de l'amplificat isolé par peR. 1COO TTC AAA CTT CAC CTG TTA ATG AAG TTA AAG TTG GAA ATA GCG GGT CTA AGT CAT TAA 61ATA ACT OOT ATT GGC TAT ATC AGC CAA CTA AAT ATA GTA TTG GTA ACT AIT ATT TAG GAA 121COO AAG CTG AAT TTA AGT CAA TGT GCG CTG CTG CTA AAG AAT ATA ATA TCA GGA TCA TTG 181TCG ACG CAA CTC TGA ATG ATA CAA CAA GTG AIT ATA GTG CAA TTT CGG ATG AAA TTA AAA UIGTA TTC CAA ATT GGA CAC ATG GTA ACA AAC MA TTT CGA ATT GGA GTG ATC GTG AAG ATG JOITTA CTC AAA ATT CGT TGT TAG GTT TAT ATG ATT OOA ATA CTA AAA ATT CTC AAG TTC AAG 36lTTC AGA CGT ATT TGA AGA ATT ATT TGG AAC GCT TGA TIT CTG ACG GAG CTT CAG GCT TTC 421GTT ATG ATG CAG CTA AGC ATA TTG MC TTC CAA GTC MT ATG ATG GCA GCT ATG GCA GCA 48lATT TCT GGC CAA ATA TTA CTG ATA ATG GGT CTG MT TTC AGT ATG GTG MG TIT TGC AGG S41ACT CGA TTT CM MG AAT CAG ATT ATG CTA ATT ACA TGA GTG TTA CAG CTT CAA ATT ACG 60lGCA ATA CGA TTC GCA ATG CGT TM AGG ATC GTG ATT TTA CCG CM GTA CTT TGC AGA ATT 66lTCA ACA TCA GTG TTC CAG CTT CTA MT TAG TM CTT GOG TCG AAT CGC ATG ATA ATT ATG nlCTA ACG ATG ATC MG TIT CGA CTT GGA TGA ATA ATA GTG ATA TTA MT TAG GCT GOG CTG 78lTTG TTG CIT CGC GTT CTG GTA GTG TTC CGC TGT TCT TTG ACC GTC CAG TTG ATG GTG GTA 84IATG GTA CTC GGT TCC CTG GCA GTT CAG AAA TTG GTG ATG CTG GCA GCA GTT TGT ATT ATG 90lATA MG CAG TTG TAG CTG TTA ATA MT TCC ATA ATG CAA TGG CTG GTC AAT CTG Figure 44: séquence de l'amplificat obtenu avec Gluconobacter sp. 018. Les symboles sont les mêmes que ceux sur la figure 17. ./ 80
On a pu comparer cette séquence avec d'autres séquences de gènes connus, les séquences les plus proches sont: -a-amylase de Bacillus subtilis (EC 3.2.1.1) : 647 bases homologues. -a-amylase de drosophile: 118 bases homologues. -Cyclomaltodextrine glucanotransférase : 87 bases homologues. ./ ./ 81
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A ADN Amy Amy+ Amp AP ARN ARNr ATP
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Plusieurs millénaires avant notre
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' ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE /'
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2.4 Milieu pour l'étude du pouvoir
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Le pourpre de bromocrésol Le pourp
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