THS-6596.pdf

.
Ta hleau
9 . Programme
pour l'ampli
IIiIcatlon
avec 'amorce arbitraire M 13
Nombre
Réaction Température/Durée de
cycles
94°C /3mn
Amplification initiale: 40°C / Smn 3
72°C / Smn
Dénaturation: 94°C / lmn
Hybridation: 60°C /2mn 32
Extension: 72°C / 3mn
8.5 Purification des produits de PCR
Après les réactions de PCR une purification du produit final est souvent nécessaire surtout
si le produit doit être utilisé par la suite pour un séquençage. Cette purification permet de
séparer le matériel nucléique amplifié du reste de réactifs utilisés. La méthode de
purification utilisée est celle de la précipitation par une solution d'acétate d'ammonium.
Technique
Mélanger le produit de PCR avec un volume de solution d'acétate d'ammonium 4M et 2
volumes d'isopropanol absolu. Incuber le mélange à température ambiante pendant 10 mn.
Centrifuger pendant 15 mn à 12000 g. Laver les sédiments avec une solution de 70%
d'éthanol. Sécher à température ambiante. Puis resuspendre le produit dans une solution
TE.
/'
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