THS-6596.pdf

5.1.3 Production de gaz
La production de gaz est étudiée sur MRS-bouillon sans extrait de viande et avec 2,5 % de
maltose. Un tube à essai contenant une cloche de Durham renversée et la ml de milieu de
culture est ensemencé avec la souche à étudier. La présence de bulles dans le tube
renversé, après incubation indique une production de gaz (Gaz +).
5.1.4 Fermentation des hydrates de carbone
Le pouvoir fermentaÎre sera étudié sur les hydrates de carbone suivants: L(+)arabinose,
gl uconate de sodi um, D(-)fructose, D(+)gl ucose, D(-)mannose, lactose, mélibiose,
maltose, saccharose, tréhalose, mélézitose, raffinose, esculine, D-salicine, p-arbutine,
D(+)galactose, D(-)Mannitol, sorbitol, D(-)ribose, D(+)xylose, N-acétyl-D-glucosamine,
amygdaline et celJobiose. Pour chaque sucre, on réalise une solution 2%. Toutes ces
solutions seront filtrées exceptée la solution d'esculine qui sera autoclavée à 121°C
pendant 10 mn. Les tests se feront sur plaques pour microtitration (cupule en U), Chaque
cupule recevra 100 III de solution d'hydrate de carbone, 40 III de paraffine stérile et 40 III
d'urle suspension de la souche à étudier dans le milieu de culture prévu pour ce test (voir
composition du milieu pour étude du pouvoir fermentaire). Les plaques ainsi remplies sont
incubées à 30°C, la lecture se fait jusqu'au sixième jour incubation.
5.1.5 Activité amylolytique
La fermentation de l'amidon est étudiée sur un milieu solide en boîte de petri contenant 3 g
d'amidon soluble. Après 48 heures d'incubation, on recouvre la surface de la culture par
une solution de lugol. Une réaction positive (amylase +) se traduit par une zone claire
autour des colonies, le reste de la boite étant violet. Pour la détection des recombinants
E.coli (amy+), vu le nombre impol1ant de souches à tester, on fait la culture dans le même
milieu mais en présence de bromocrésoJ pourpre, ce qui permet de déceler, par le virage
du bleu au jaune, les recombinants amylase positif.
5.1.6 Production de bactériocine
Ensemencer le milieu BSM-agar en déposant en surface 1111 d'une culture de 16 heures de
la souche à étudier. Après séchage, on incube la culture à 25°C pendant 24 heures dans des
conditions de microaérophilie, puis on recouvre la surface de la boîte de petri avec 140 ml
de culture de la souche test. On incube encore pendant 16 à 20 heures dans les mêmes
conditions. S'il y a production de bactériocine active sur la souche indicatrice, il se fonne
une zone d'inhibition autour de la zone de croissance de la souche productrice.
5.2 Caractères biochimiques des levures
5.2.1 Hydrolyse de l'urée
Un bouillon contenant de l'urée (2%) est ensemencé avec une préculture de la souche à
tester et incubé à 37°C. Ce bouillon est mauve à l'état frais, l'hydrolyse de l'urée se traduit
par une a1calinisation du milieu qui prend une teinte rosée puis rouge dans une durée qui
ne dépasse pas 4 heures.
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