THS-6596.pdf

3. ISOLEMENT DE LA MICROFLORE (figure 4)
3.1 Dénombrement et isolement des colonies
A partir de chaque échantillon de vin de palme on réalise des dilutions successives de 10-1
à 10- 7 . La solution de dilution est constituée de 1% peptone et de 0,85% NaCl. Pour
chaque dilution on étale un volume de 100 J..lI sur milieux solides (MRS-agar, NBB-agar et
standard I-agar pour le comptage des colonies bactériennes et PEG-agar pour les levures).
Le dénombrement se fera après 72 heures de croissance à 37°C sous une atmosphère
constitué de 90% d'azote et 10% de gaz carbonique. Le résultat est exprimé en unité
formant une colonie par millilitre d'échantillon examiné. Les colonies dont le nombre est
supérieur à 1.10+ 5 UFC/ml d'échantillons feront l'objet de plusieurs ensemencements sur
lvfRS-agar pour l'obtention de cultures pures.
3.2 Les critères de sélection de micro-organismes du vin de palme
Toutes les colonies à gram positif et catalase négatif seront sélectionnées. Tandis que les
colonies ne remplissant pas ces conditions ne le seront que si elles sont productrices au
moins d'amylase et / ou de bactériocine ou si elles sont présentes en grand nombre (de
l'ordre de 10+ 6 UFC/ml d'échantillon étudié ).
3.3 Réalisation d'une collection de micro-organismes du vin de palme
Pour chaque souche sélectionnée, on fera une culture de longue durée qui entrera dans la
collection de micro-organismes du vin de palme.
Pour la réalisation de cultures de longue durée, on centrifuge 10 ml d'une culture jeune
(culture d'environ 12 heures) à 5000 g pendant 10 minutes. Le sédiment ainsi obtenu sera
resuspendu, s'il s'agit de bactéries, dans un bouillon MRS frais contenant 50% de
glycérine. Chez les levures le culot sera resuspendu dans du bouillon PEG contenant 10%
de glycérine. La suspension est transférée ensuite dans un cryotube de 1,2 ml et conservée
à -80°e.
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