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Le pourpre de bromocrésol Le pourpre de bromocrésol est utilisé pour la détection de l'activité amylolytique. L'acidification se traduit par un virage du milieu du bleu au jaune, (variation de pH de 6,8 à 5,2). 15
3. ISOLEMENT DE LA MICROFLORE (figure 4) 3.1 Dénombrement et isolement des colonies A partir de chaque échantillon de vin de palme on réalise des dilutions successives de 10-1 à 10- 7 . La solution de dilution est constituée de 1% peptone et de 0,85% NaCl. Pour chaque dilution on étale un volume de 100 J..lI sur milieux solides (MRS-agar, NBB-agar et standard I-agar pour le comptage des colonies bactériennes et PEG-agar pour les levures). Le dénombrement se fera après 72 heures de croissance à 37°C sous une atmosphère constitué de 90% d'azote et 10% de gaz carbonique. Le résultat est exprimé en unité formant une colonie par millilitre d'échantillon examiné. Les colonies dont le nombre est supérieur à 1.10+ 5 UFC/ml d'échantillons feront l'objet de plusieurs ensemencements sur lvfRS-agar pour l'obtention de cultures pures. 3.2 Les critères de sélection de micro-organismes du vin de palme Toutes les colonies à gram positif et catalase négatif seront sélectionnées. Tandis que les colonies ne remplissant pas ces conditions ne le seront que si elles sont productrices au moins d'amylase et / ou de bactériocine ou si elles sont présentes en grand nombre (de l'ordre de 10+ 6 UFC/ml d'échantillon étudié ). 3.3 Réalisation d'une collection de micro-organismes du vin de palme Pour chaque souche sélectionnée, on fera une culture de longue durée qui entrera dans la collection de micro-organismes du vin de palme. Pour la réalisation de cultures de longue durée, on centrifuge 10 ml d'une culture jeune (culture d'environ 12 heures) à 5000 g pendant 10 minutes. Le sédiment ainsi obtenu sera resuspendu, s'il s'agit de bactéries, dans un bouillon MRS frais contenant 50% de glycérine. Chez les levures le culot sera resuspendu dans du bouillon PEG contenant 10% de glycérine. La suspension est transférée ensuite dans un cryotube de 1,2 ml et conservée à -80°e. / / 16
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Les « non lactiques» Paenibacillu
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Collins, M.D., Rodrigues D., Ash c.
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Martinez Murcia A. J., and Collins
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