Revue internationale d'écologie méditerranéenne International ...

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DIVERSITÉ GÉNÉTIQUE DE POPULATIONS NATURELLES DE ROSMARINUS OFFICINALIS L. EN TUNISIE ◆ turation morphologique des populations s’opère selon les étages bioclimatiques (Khiari et al., 1998 ; Khiari & Boussaid, 2000b). L’analyse du polymorphisme isoenzymatique des populations naturelles de romarin en Tunisie constitue une étape complémentaire à l’étude de la variabilité phénotypique. Elle devrait permettre de mieux évaluer la diversité génétique intra et inter-populations, estimer leur niveau de différenciation et aiderait à l’élaboration de programmes de conservation de ces populations (Soltis et al., 1992 ; Ge et al., 1997 ; Gao et al., 2000 ; Sarthou et al., 2001). MATÉRIEL ET MÉTHODES Populations analysées et échantillonnage Dix-neuf populations de romarin, prospectées dans l’ensemble de l’aire de répartition de l’espèce en Tunisie (étages bioclimatiques sub-humide à aride supérieur), ont été analysées. Le choix des populations a été effectué en fonction du bioclimat, qui s’accorde souvent à l’éloignement géographique des populations (Emberger, 1966) et à la nature des sites (garrigues, forêts, maquis) (fig. 1, tableau 1). Les populations, de taille variable (1000 à 10 000 individus), ont été collectées à des distances qui varient de 20 à 500 km. Elles se développent sous une pluviométrie annuelle comprise entre 150 et 700 mm/an et à des altitudes qui varient de 400 à 1000 m. Le substrat est variable, calcaire, marno-calcaire ou gréseux. Les populations se développant dans des forêts peu défrichées, sont assez denses (3-5 ind./m 2 ) et présentent des individus assez ramifiés. La taille des plantes peut dépasser 1,5 m. Celles, prospectées dans des garrigues, sont surpâturées et surexploitées pour la distillation des essences. Elles poussent sur un substrat caillouteux et très pauvre en matière organique. Les espèces dominantes dans ces sites sont des chaméphytes pérennes de nature variable selon le bioclimat et la nature du substrat (Stipa tenacissima L., Ampelodesmos mauritanicus (Poir.) Dur. et Sch., Artemisia herba-alba Asso., Cistus salviifolius L., C. monspeliensis L., Fumana thymifolia L., Calicotome villosa (Poir.) Link., Genista L. ssp,…). Les individus sont très épars (2-3 ind. / 30m 2 ) et réduits à l’état de buisson (20- 60 cm de hauteur). Selon la taille des populations, vingt à quarante individus ont été repérés au hasard dans chaque site selon ecologia mediterranea, tome 29, fascicule 2, 2003, p. 199-216 des gradients sud-nord et est-ouest, sur des superficies comprises entre 4 à 10 ha. Les individus ont été choisis à des distances supérieures à 20 m pour éviter de collecter des échantillons d’un même individu puisque l’espèce se multiplie de façon végétative. Sur chaque plante ont été prélevés des rameaux végétatifs avec des feuilles jeunes. Les échantillons ont été mis dans des sacs en plastique dans de la glace et transportés au laboratoire. Electrophorèse et systèmes enzymatiques analysés Pour chaque individu, 0,75g de feuilles jeunes ont été broyées, à froid, dans 1ml de Tris HCl (0,1M ; pH 7,5), contenant du β-mercaptoéthanol (1% v/v) et de BSA (sérum albumine bovine) (1,5% w/v) additionné de 10% w/v de PVP40 (polyvinylpyrrolidone 40 000). Les extraits sont stockés à -80°C jusqu’à leur utilisation. Huit isozymes, révélées par électrophorèse horizontale sur gel d’amidon à 13%, ont été testés pour évaluer la variabilité génétique des populations. Nous avons analysé la Phosphoglucoisomérase (Pgi ; EC 5.3.1.9), la Phosphoglucomutase (Pgm ; EC 2.7.5.1), la leucine aminopeptidase (Lap ; EC 3.4.11.1), la Glutamate oxaloacétate transaminase (Got ; EC 2.6.1.1), l’Isocitrate déshydrogénase (Icd ; EC 1.1.1.42), la 6-Phosphogluconate déshydrogénase (6-Pgd ; EC 1.1.1.44), l’Alcool déshydrogénase (Adh ; EC 1.1.1.1) et les estérases (Est ; EC 3.1.1.1). La Pgi, la Pgm, l’Icd, et la 6-Pgd, ont été révélées en utilisant un tampon de migration à base d’histidine citrate (0,065 M.L -1 L-histidine et 0,02 Mol.L -1 d’acide citrique, pH 6,8) (Stuber et al., 1977). La migration, anodique, se déroule sous un ampérage constant de 50 mA pendant 6 heures à 4°C. Un tampon lithium borate (0,04 mol.L -1 hydroxyde de lithium et 0,19 mol.L -1 acide borique à pH 8,3) a été utilisé pour révéler la Got, la Lap, l’Est et l’Adh. Le tampon de gel est un mélange de neuf parts du tampon de migration pour une part d’un tampon Tris-acide citrique (0,05 mol.L -1 Tris et 0,007 mol.L -1 acide citrique à pH 8,3). La migration se déroule pendant 7 heures à une intensité de courant constante (40 mA). La révélation des isozymes a été effectuée selon les procédures préconisées par Soltis et al. (1983), Wendel et Weeden (1989), Zaouali et al. (2003). Analyse des données L’interprétation génétique des zymogrammes a été réalisée selon les principes avancés par Pernes (1984), Wendel et Weeden (1989), Hannan et Orick (2000) et 203
204 ◆ Y. ZAOUALI, C. MESSOUAD & M. BOUSSAID Figure 1. Localisation géographique et bioclimatique des 19 populations de Rosmarinus officinalis analysées en Tunisie. Figure 1. Geographic and bioclimatic situation of the 19 Rosmarinus officinalis populations analyzed in Tunisia. ecologia mediterranea, tome 29, fascicule 2, 2003
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Tome 29 Fascicule 2, 2003 ISSN 0153
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Vegetation along an elevation gradi
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