Revue internationale d'écologie méditerranéenne International ...

DIVERSITÉ GÉNÉTIQUE DE POPULATIONS NATURELLES DE ROSMARINUS OFFICINALIS L. EN TUNISIE ◆
turation morphologique des populations s’opère selon
les étages bioclimatiques (Khiari et al., 1998 ; Khiari &
Boussaid, 2000b).
L’analyse du polymorphisme isoenzymatique des
populations naturelles de romarin en Tunisie constitue
une étape complémentaire à l’étude de la variabilité
phénotypique. Elle devrait permettre de mieux évaluer
la diversité génétique intra et inter-populations, estimer
leur niveau de différenciation et aiderait à l’élaboration de
programmes de conservation de ces populations (Soltis
et al., 1992 ; Ge et al., 1997 ; Gao et al., 2000 ; Sarthou
et al., 2001).
MATÉRIEL ET MÉTHODES
Populations analysées et échantillonnage
Dix-neuf populations de romarin, prospectées dans
l’ensemble de l’aire de répartition de l’espèce en Tunisie
(étages bioclimatiques sub-humide à aride supérieur), ont
été analysées. Le choix des populations a été effectué en
fonction du bioclimat, qui s’accorde souvent à l’éloignement
géographique des populations (Emberger, 1966)
et à la nature des sites (garrigues, forêts, maquis) (fig. 1,
tableau 1).
Les populations, de taille variable (1000 à 10 000
individus), ont été collectées à des distances qui varient
de 20 à 500 km. Elles se développent sous une pluviométrie
annuelle comprise entre 150 et 700 mm/an et à
des altitudes qui varient de 400 à 1000 m. Le substrat
est variable, calcaire, marno-calcaire ou gréseux. Les
populations se développant dans des forêts peu défrichées,
sont assez denses (3-5 ind./m 2 ) et présentent
des individus assez ramifiés. La taille des plantes peut
dépasser 1,5 m. Celles, prospectées dans des garrigues,
sont surpâturées et surexploitées pour la distillation des
essences. Elles poussent sur un substrat caillouteux et très
pauvre en matière organique. Les espèces dominantes
dans ces sites sont des chaméphytes pérennes de nature
variable selon le bioclimat et la nature du substrat (Stipa
tenacissima L., Ampelodesmos mauritanicus (Poir.) Dur. et
Sch., Artemisia herba-alba Asso., Cistus salviifolius L., C.
monspeliensis L., Fumana thymifolia L., Calicotome villosa
(Poir.) Link., Genista L. ssp,…). Les individus sont très
épars (2-3 ind. / 30m 2 ) et réduits à l’état de buisson (20-
60 cm de hauteur).
Selon la taille des populations, vingt à quarante individus
ont été repérés au hasard dans chaque site selon
ecologia mediterranea, tome 29, fascicule 2, 2003, p. 199-216
des gradients sud-nord et est-ouest, sur des superficies
comprises entre 4 à 10 ha. Les individus ont été choisis à
des distances supérieures à 20 m pour éviter de collecter
des échantillons d’un même individu puisque l’espèce se
multiplie de façon végétative. Sur chaque plante ont été
prélevés des rameaux végétatifs avec des feuilles jeunes.
Les échantillons ont été mis dans des sacs en plastique
dans de la glace et transportés au laboratoire.
Electrophorèse et systèmes
enzymatiques analysés
Pour chaque individu, 0,75g de feuilles jeunes ont été
broyées, à froid, dans 1ml de Tris HCl (0,1M ; pH 7,5),
contenant du β-mercaptoéthanol (1% v/v) et de BSA
(sérum albumine bovine) (1,5% w/v) additionné de 10%
w/v de PVP40 (polyvinylpyrrolidone 40 000). Les extraits
sont stockés à -80°C jusqu’à leur utilisation.
Huit isozymes, révélées par électrophorèse horizontale
sur gel d’amidon à 13%, ont été testés pour évaluer
la variabilité génétique des populations. Nous avons
analysé la Phosphoglucoisomérase (Pgi ; EC 5.3.1.9), la
Phosphoglucomutase (Pgm ; EC 2.7.5.1), la leucine aminopeptidase
(Lap ; EC 3.4.11.1), la Glutamate oxaloacétate
transaminase (Got ; EC 2.6.1.1), l’Isocitrate déshydrogénase
(Icd ; EC 1.1.1.42), la 6-Phosphogluconate
déshydrogénase (6-Pgd ; EC 1.1.1.44), l’Alcool déshydrogénase
(Adh ; EC 1.1.1.1) et les estérases (Est ; EC
3.1.1.1). La Pgi, la Pgm, l’Icd, et la 6-Pgd, ont été révélées
en utilisant un tampon de migration à base d’histidine
citrate (0,065 M.L -1 L-histidine et 0,02 Mol.L -1 d’acide
citrique, pH 6,8) (Stuber et al., 1977). La migration,
anodique, se déroule sous un ampérage constant de 50
mA pendant 6 heures à 4°C. Un tampon lithium borate
(0,04 mol.L -1 hydroxyde de lithium et 0,19 mol.L -1 acide
borique à pH 8,3) a été utilisé pour révéler la Got, la Lap,
l’Est et l’Adh. Le tampon de gel est un mélange de neuf
parts du tampon de migration pour une part d’un tampon
Tris-acide citrique (0,05 mol.L -1 Tris et 0,007 mol.L -1
acide citrique à pH 8,3). La migration se déroule pendant
7 heures à une intensité de courant constante (40 mA).
La révélation des isozymes a été effectuée selon les
procédures préconisées par Soltis et al. (1983), Wendel
et Weeden (1989), Zaouali et al. (2003).
Analyse des données
L’interprétation génétique des zymogrammes a été
réalisée selon les principes avancés par Pernes (1984),
Wendel et Weeden (1989), Hannan et Orick (2000) et
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