CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne

de l’automate. C’est elle qui permet de déterminer si oui ou non le test est positif. Elle est
interprétée de la manière suivante :
Valeur du test = RFV échantillon / RFV standard
Si la valeur du test est supérieure ou égale au seuil défini pour le paramètre recherché, alors le
test est positif. Pour le VIDAS EES, cette valeur est de 0,10 et pour le VIDAS ECPT UP de
0,04.
Figure 27 : Protocole d’utilisation du VIDAS ECPT.
5. La Real Time PCR (RT-PCR)
Cette technique a été utilisée pour les deux études décrites dans les chapitres III et IV.
L’extraction d’ADN a été réalisée selon les recommandations du kit Prepman commercialisé
par la société Applied Biosystems : 1 mL du bouillon d’enrichissement a été prélevé dans un
microtube vissé puis une centrifugation de 2 min à 13 000 rpm (centrifugeuse 5415 D,
eppendorf) a été effectuée. Après cette étape, le surnageant a été éliminé et le culot mélangé
avec 200µL de solution PREPMAN par aspiration-refoulement grâce à une micro-pipette.
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