CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne

antigénicité et les mêmes propriétés de fixation, leur détection n'est pas garantie (Smith and
Scotland, 1993).
Parmi les kits ELISA disponibles, on peut citer le « Premier EHEC » ciblant les Shiga-toxines
(Meridian Diagnostics Inc, USA) et qui a été évalué dans les selles par Kehl et al. (1997) et
par Mackenzie et al. (1998). Ce test est effectué en microplaques directement à partir des
échantillons ou après enrichissement et il a été jugé adéquat pour la détection des STEC en
routine. Le « Premier EHEC » a également été comparé par Willford et al. (2009) avec deux
autres kits ELISA disponibles dans le commerce, le « Ridascreen Verotoxin Enzyme
Immunoassay » (rBiopharm, Germany) et le « ProSpecT Shiga-Toxin E. coli Microplate
Assay » (Remel Inc.) qui sont réalisés en microplaques à partir d’un échantillon enrichi. En
revanche, les trois tests se sont montrés incapables de reconnaître les variants Stx2d et Stx2e
ce qui indique que les souches de STEC exprimant ces variants ne seront pas détectées par ces
méthodes.
Des kits utilisant la technique de « reverse passive agglutination assay » (RPLA) adaptés à la
détection des toxines stx ont également été conçus et commercialisés. Cette technique met en
jeu des billes enduites d’anticorps qui interagissent avec les Shiga-toxines et produisent une
couche diffuse à la base des puits où se déroule la réaction. Karmali et al.(1999) ont comparé
à partir de cultures pures le kit « VEROTOX-F » (Denka Seiken, Japon) avec le test sur
cellules Vero et ont observé une sensibilité de 0,7 ng.ml-1 et 0,6 ng.ml-1 pour stx1 et
stx2 respectivement. Ce test pouvait détecter stx1, stx2 et le variant stx2c. Le « VTEC RPLA
» (Unipath Limited, Royaume-Uni) a été évalué par Beutin et al. (1996) à partir de surnageant
de culture pure de STEC pathogènes traité avec de la polymyxine. Les souches de STEC
testées ont ainsi été isolées et le variant stx1 ou stx2 a été déterminé de façon fiable en 72 à 96
heures. Un autre kit, le « STEC-Screen « Seiken » RPLA » a également été évalué et comparé
avec le test sur cellules Vero par Beutin et al. (2002), à partir d’échantillons de selles. Ce test
s’est montré précis, rapide, facile d’utilisation et adapté à l'examen en routine.
Des méthodes d’immunochromatographie utilisant des anticorps monoclonaux spécifiques
des Shiga-toxines ont été également développées. Ces méthodes permettent une détection
rapide, en moins de 10 min pour le « Duopath verotoxin test » (Merck, Germany) (Park et al.,
2003). Ce test a été comparé au « Premier EHEC », utilisé comme référence, et a montré une
absence de réaction croisée avec d'autres organismes entériques.
La méthode IMS a également été adaptée à la détection et l’isolement des souches appartenant
aux 5 sérogroupes majeurs de STEC, à l'aide de billes magnétiques recouvertes d'anticorps
dirigés contre les antigènes O26, O111, O103 et O145 (disponibles dans le commerce, Dynal
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