CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne
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antigénicité et les mêmes propriétés <strong>de</strong> fixation, leur détection n'est pas garantie (Smith and<br />
Scotland, 1993).<br />
Parmi les kits ELISA disponibles, on peut citer le « Premier EHEC » ciblant les Shiga-toxines<br />
(Meridian Diagnostics Inc, USA) et qui a été évalué dans les selles par Kehl et al. (1997) et<br />
par Mackenzie et al. (1998). Ce test est effectué en microplaques directement à partir <strong>de</strong>s<br />
échantillons ou après enrichissement et il a été jugé adéquat pour la détection <strong>de</strong>s STEC en<br />
routine. Le « Premier EHEC » a également été comparé par Willford et al. (2009) avec <strong>de</strong>ux<br />
autres kits ELISA disponibles dans le commerce, le « Ridascreen Verotoxin Enzyme<br />
Immunoassay » (rBiopharm, Germany) et le « ProSpecT Shiga-Toxin E. coli Microplate<br />
Assay » (Remel Inc.) qui sont réalisés en microplaques à partir d’un échantillon enrichi. En<br />
revanche, les trois tests se sont montrés incapables <strong>de</strong> reconnaître les variants Stx2d et Stx2e<br />
ce qui indique que les souches <strong>de</strong> STEC exprimant ces variants ne seront pas détectées par ces<br />
métho<strong>de</strong>s.<br />
Des kits utilisant la technique <strong>de</strong> « reverse passive agglutination assay » (RPLA) adaptés à la<br />
détection <strong>de</strong>s toxines stx ont également été conçus et commercialisés. Cette technique met en<br />
jeu <strong>de</strong>s billes enduites d’anticorps qui interagissent avec les Shiga-toxines et produisent une<br />
couche diffuse à la base <strong>de</strong>s puits où se déroule la réaction. Karmali et al.(1999) ont comparé<br />
à partir <strong>de</strong> cultures pures le kit « VEROTOX-F » (Denka Seiken, Japon) avec le test sur<br />
cellules Vero et ont observé une sensibilité <strong>de</strong> 0,7 ng.ml-1 et 0,6 ng.ml-1 pour stx1 et<br />
stx2 respectivement. Ce test pouvait détecter stx1, stx2 et le variant stx2c. Le « VTEC RPLA<br />
» (Unipath Limited, Royaume-Uni) a été évalué par Beutin et al. (1996) à partir <strong>de</strong> surnageant<br />
<strong>de</strong> culture pure <strong>de</strong> STEC pathogènes traité avec <strong>de</strong> la polymyxine. Les souches <strong>de</strong> STEC<br />
testées ont ainsi été isolées et le variant stx1 ou stx2 a été déterminé <strong>de</strong> façon fiable en 72 à 96<br />
heures. Un autre kit, le « STEC-Screen « Seiken » RPLA » a également été évalué et comparé<br />
avec le test sur cellules Vero par Beutin et al. (2002), à partir d’échantillons <strong>de</strong> selles. Ce test<br />
s’est montré précis, rapi<strong>de</strong>, facile d’utilisation et adapté à l'examen en routine.<br />
Des métho<strong>de</strong>s d’immunochromatographie utilisant <strong>de</strong>s anticorps monoclonaux spécifiques<br />
<strong>de</strong>s Shiga-toxines ont été également développées. Ces métho<strong>de</strong>s permettent une détection<br />
rapi<strong>de</strong>, en moins <strong>de</strong> 10 min pour le « Duopath verotoxin test » (Merck, Germany) (Park et al.,<br />
2003). Ce test a été comparé au « Premier EHEC », utilisé comme référence, et a montré une<br />
absence <strong>de</strong> réaction croisée avec d'autres organismes entériques.<br />
La métho<strong>de</strong> IMS a également été adaptée à la détection et l’isolement <strong>de</strong>s souches appartenant<br />
aux 5 sérogroupes majeurs <strong>de</strong> STEC, à l'ai<strong>de</strong> <strong>de</strong> billes magnétiques recouvertes d'anticorps<br />
dirigés contre les antigènes O26, O111, O103 et O145 (disponibles dans le commerce, Dynal<br />
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