CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne

Figure 14 : Automate chromo4 à gauche et automate Miniopticon à droite
Ces automates permettent la réalisation d’une PCR. Lors de l’amplification une sonde de type
Beacon (sonde brevetée) s’hybride sur la séquence cible permettant l’émission de
fluorescence. La lecture de fluorescence se fait au moment de l’hybridation. Le logiciel
associé à l’appareil calcule automatiquement la relation entre l’intensité de fluorescence et le
cycle d’amplification. Cette relation indique la présence ou l’absence présomptive de E. coli
O157:H7 dans la prise d’essai analysée. Un ADN synthétique « contrôle interne » est amplifié
en même temps que la séquence cible.
La durée de la PCR est comprise entre 2h20 et 2h30 et un kit IQ-Check contient la quantité de
réactifs nécessaire pour 96 analyses (réactifs et billes de lyse, sondes fluorescentes, solution
d’amplification, contrôle négatif et positif).
Il est important de noter que l’ensemble de ces kits de détection n’est validé que pour un
domaine d’application particulier (fromage, viande crue de bœuf…), et que le protocole
d’enrichissement varie en fonction des kits (durée d’enrichissement, prise d’essai, bouillon
d’enrichissement…).
Le test HQS_E.Coli O157:H7 (ADNucleis):
Le test HQS E. coli O157:H7 repose sur la technique PCR associée à la détection utilisant le
SYBERgreen (Figure 15). Cette méthode permet la détection des E. coli O157:H7 après un
enrichissement de 12 à 24 heures à 37°C en bouillon PCRone®.
Le kit est constitué d’un mélange réactionnel d’extraction d’ADN génomique, d’un kit de
purification des ADN et de tubes de réaction PCR destinés à l’obtention d’amplicons
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