CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne

Les systèmes ELISA/ELFA
Ces méthodes immunologiques donnent un résultat en 2 heures en microplaque après une
phase d’enrichissement (le plus souvent d’une durée de 24 heures).
Pour les systèmes ELISA, les anticorps spécifiques d’E. coli O157:H7 sont fixés au fond des
puits de microplaques. L’aliquote du bouillon d’enrichissement est déposé dans ces puits.
Après incubation et une série de lavages, un anticorps "révélateur" anti-O157 est ajouté pour
détecter le couple anticorps-bactéries. Ce deuxième anticorps est couplé à une enzyme qui
permet une révélation colorimétrique. La société r-Biopharm commercialise un test en
microplaque permettant la recherche des toxines dans un bouillon d’enrichissement en 2
heures, il s’agit du kit RIDASCRREN®Verotoxin.
Basé sur le même principe la société bioMérieux® a mis au point des kits ELISA (ELFA)
automatisées. Les Kit VIDAS® sont des tests employant le système VIDAS® (Figure 8).
Figure 8 : l’automate VIDAS avec des cônes et des barrettes
Le cône à usage unique sert à la fois de phase solide et de système de pipetage. L'intérieur du
cône est recouvert d’anticorps ou d'une protéine recombinante de queue de phage qui permet
la capture de certaines souches de STEC (Figure 9). Les autres réactifs de la réaction ELFA
sont prêts à l'emploi et sont pré-répartis dans la cartouche. Une partie du bouillon
d'enrichissement est déposée dans la cartouche, puis une succession de cycles
d'aspiration/refoulement du milieu réactionnel est réalisé par l’instrument. Plus précisément,
les E. coli cibles présents sont captés par l’anticorps ou la protéine recombinante de phage (en
fonction du kit utilisé) fixée à l'intérieur du cône. Les éléments restés libres sont éliminés par
lavage. Ensuite, le conjugué à la phosphatase alcaline est aspiré/refoulé dans le cône et se fixe
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