CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne
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Les systèmes ELISA/ELFA<br />
Ces métho<strong>de</strong>s immunologiques donnent un résultat en 2 heures en microplaque après une<br />
phase d’enrichissement (le plus souvent d’une durée <strong>de</strong> 24 heures).<br />
Pour les systèmes ELISA, les anticorps spécifiques d’E. coli O157:H7 sont fixés au fond <strong>de</strong>s<br />
puits <strong>de</strong> microplaques. L’aliquote du bouillon d’enrichissement est déposé dans ces puits.<br />
Après incubation et une série <strong>de</strong> lavages, un anticorps "révélateur" anti-O157 est ajouté pour<br />
détecter le couple anticorps-bactéries. Ce <strong>de</strong>uxième anticorps est couplé à une enzyme qui<br />
permet une révélation colorimétrique. La société r-Biopharm commercialise un test en<br />
microplaque permettant la recherche <strong>de</strong>s toxines dans un bouillon d’enrichissement en 2<br />
heures, il s’agit du kit RIDASCRREN®Verotoxin.<br />
Basé sur le même principe la société bioMérieux® a mis au point <strong>de</strong>s kits ELISA (ELFA)<br />
automatisées. Les Kit VIDAS® sont <strong>de</strong>s tests employant le système VIDAS® (Figure 8).<br />
Figure 8 : l’automate VIDAS avec <strong>de</strong>s cônes et <strong>de</strong>s barrettes<br />
Le cône à usage unique sert à la fois <strong>de</strong> phase soli<strong>de</strong> et <strong>de</strong> système <strong>de</strong> pipetage. L'intérieur du<br />
cône est recouvert d’anticorps ou d'une protéine recombinante <strong>de</strong> queue <strong>de</strong> phage qui permet<br />
la capture <strong>de</strong> certaines souches <strong>de</strong> STEC (Figure 9). Les autres réactifs <strong>de</strong> la réaction ELFA<br />
sont prêts à l'emploi et sont pré-répartis dans la cartouche. Une partie du bouillon<br />
d'enrichissement est déposée dans la cartouche, puis une succession <strong>de</strong> cycles<br />
d'aspiration/refoulement du milieu réactionnel est réalisé par l’instrument. Plus précisément,<br />
les E. coli cibles présents sont captés par l’anticorps ou la protéine recombinante <strong>de</strong> phage (en<br />
fonction du kit utilisé) fixée à l'intérieur du cône. Les éléments restés libres sont éliminés par<br />
lavage. Ensuite, le conjugué à la phosphatase alcaline est aspiré/refoulé dans le cône et se fixe<br />
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