CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne

phénomène mais il serait surtout important de travailler sur la mise au point de géloses à
utiliser pour l’isolement.
L’efficacité de ces méthodes de confirmation pourrait être améliorée par la mise au point et
l’utilisation de géloses spécifiques. A ce jour, les géloses les plus performantes, sont conçues
pour l’isolement du sérogroupe O157. Les autres sérogroupes n’ont pas de gélose qui leur soit
réellement spécifique. Des progrès restent donc à faire sur ce point.
Pourtant le milieu mis au point par Possé et al. (2008) pourrait apporter un plus en terme de
spécificité à notre nouvelle méthode. Il permet l’isolement sur une même gélose des cinq
sérogroupes de STEC avec des caractéristiques morphologiques des colonies, spécifiques à
chacun d’eux. Nous avons constaté en revanche que sa préparation est complexe et rend
difficilement envisageable son utilisation pour des analyses de routine.
Une autre méthode d’isolement des souches de STEC non-O157 est basée sur la détection de
la production d’entérohémolysine. Beutin et al. (1989) ont mis en évidence une association
entre la production d’entérohemolysine et la production de Shiga-toxines dans 89% des
souches d’E. coli appartenant à neuf sérotypes différents. L’activité entérohémolytique peut
être détectée après une nuit d'incubation sur gélose au sang contenant des globules rouges de
moutons lavés additionnés de calcium. Les colonies isolées avec une activité
entérohémolytique doivent être ensuite confirmées pour la présence des gènes stx car
certaines souches non STEC produisant l’entérohémolysine peuvent également être détectées.
Il est donc important d’approfondir les recherches sur ces milieux et de les retravailler pour
les rendre plus « accessibles ». De tels milieux permettraient d’améliorer cette étape de
confirmation qui est très discutée, mais qui reste indispensable pour éliminer les faux résultats
positifs
Rappelons également que l’isolement d’une colonie caractéristique du sérogroupe suspecté
nécessite encore une validation par des techniques comme les tests latex, les galeries Api mais
également les analyses génétiques par PCR. Ces analyses complémentaires sont nécessaires
pour s’assurer que la bactérie trouvée est bien celle recherchée et qu’elle possède bien les
gènes nécessaires à sa virulence.
Pour conclure…
Les travaux décrits dans ce mémoire ont permis d’apporter des améliorations au protocole de
détection des STEC grâce à l’optimisation de certaines étapes, notamment en élaborant un
enrichissement permettant la croissance des E. coli O26 dans les fromages au lait cru en vue
de leur détection par une méthode immunologique automatisée : le VIDAS EES. Nous avons
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