CHAPITRE 1 - Université de Bourgogne

Figure 30 : Les différentes parties d’un bactériophage
2.2. Détermination des concentrations nécessaires dans le cône
- Fabrication des cônes
L’élaboration du cône contenant les protéines de phage ciblant les 5 sérogroupes de E. coli
s’est fait en plusieurs étapes.
Les performances des protéines de phage de chaque sérogroupe ont été évaluées par rapport à
celles des anticorps qui étaient précédemment utilisés. Pour se faire des coating ont été
réalisés : pour chaque sérogroupe, d’une part des séries de cônes contenant les protéines de
phage à différentes concentrations, et de l’autre une série de cône contenant l’anticorps à la
concentration que l’on connaissait comme optimale ont été fabriquées. Précisons que les
cônes étaient coatés avec un seul type de phage ou d’anticorps pour cette première partie.
Un coating se déroule en trois étapes :
- jour 1 : sensibilisation des cônes en BSA-biotinylés
- jour 2 : sensibilisation des cônes en streptavidine dans un premier temps puis en
anticorps ou protéines de phage.
- jour 3 : séchage et ensachage des cônes
- Protocole d’évaluation des cônes phage vs anticorps
Ces différents cônes ont ensuite été évalués par nos soins ainsi que ceux de la société
bioMérieux. Les travaux ont été réalisés sur des bouillons de souches pures à différentes
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