Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

La spectrométrie de masse MALDI peut également être appliquée aux
macromolécules de haut poids moléculaire si leur polydispersité n’est pas trop importante
(inférieure à 1.1). L’utilisation de cette technique pour l’analyse des polysaccharides
polydisperses requiert le couplage avec une séparation préalable par chromatographie
d’exclusion stérique. Ainsi on diminue la polydispersité des échantillons jusqu’à des valeurs
compatibles avec l’analyse MALDI. 154
I.3.2.e. Profil de masse et poids moléculaire
Le poids moléculaire est une propriété clé d’un polymère car il influence directement les
propriétés physiques comme la solubilité, la viscosité… Une estimation du degré de
polymérisation et donc a fortiori du poids moléculaire peut être faite par le dosage des oses
réducteurs. 124 Globalement les xylanes ont un dégré de polymérisation relativement faible (en
général inférieur ou égal à 200). Même si la connaissance du poids moléculaire moyen est une
donnée intéressante, c’est surtout la distribution en masse qui caractérise un polymère. En
effet, les polysaccharides végétaux peuvent présenter une polydispersité importante. Une des
techniques les plus répandues pour ce type d’analyse est la chromatographie d’exclusion
stérique qui permet de séparer les macromolécules en fonction de leur poids moléculaire, ou
plus exactement en fonction de leur volume hydrodynamique qui prend en compte la
conformation des molécules. La calibration peut être effectuée avec des dextrans de poids
moléculaire connu, s’ils présentent une forte similitude avec les polysaccharides étudiés à
l’aide d’un réfractomètre comme détecteur. La spectrométrie de masse MALDI est une
alternative dont le développement semble limité.
Depuis quelques années, une nouvelle technique est disponible pour déterminer la masse
moléculaire de polysaccharides ; c’est le détecteur MALLS (Multi-Angle Laser Light
Scattering) que l’on couple classiquement à une chromatographie d’exclusion stérique (SEC).
Le principe est simple ; un faisceau de lumières polarisées est envoyé sur l’échantillon et la
dispersion de la lumière est détectée. Dans le cas du MALLS, la dispersion de la lumière est
détectée à différents angles de façon simultanée et l’intensité de la lumière à chaque angle est
proportionnelle à la masse molaire et à la concentration de la molécule. Pour les
macromolécules plus petites sans dépendance angulaire de la lumière dispersée, la détection
d’un seul angle est suffisante. Cependant quand les molécules sont de tailles plus importantes,
davantage de lumière est diffusée dans toutes les directions et alors le MALLS devient
indispensable. Dans ce système SEC-MALLS, les macromolécules polysaccharidiques sont
d’abord fractionnées conformément à leur volume hydrodynamique, puis l’intensité de la
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