Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

tous les protons anomériques et ainsi déterminer la séquence des unités osidiques. Les
spectres HMQC (Heteronuclear MultiQuantum Coherence) permettent de corréler chaque
proton avec le carbone auquel il est lié. Dans ce cas, outre l’identification des carbones et la
détermination de leurs déplacements chimiques, l’observation d’un déblindage des carbones
permet de déterminer la substitution, c’est-à-dire les points de branchements des
monosaccharides.
Les spectres HMBC (Heteronuclear Multiple-Bond Correlation) donnent les corrélations 1 H-
13 C et les constantes 3 J associées. Il est alors possible de corréler les noyaux distants de 3
liaisons covalentes, notamment les constantes 3 JH1-Cx où x est la position du carbone du
monosaccharide voisin inclus dans la liaison glycosidique (Figure 42). Ainsi, on peut préciser
l’enchaînement des monosaccharides et donc, la séquence de l’oligosaccharide.
HO
H
HO
C 3
H
OH
C 5
H
H
O
OH
H
Figure 42 : Schéma représentant les corrélations 3 JH,C carbone/proton observées à partir du proton H-1 dans une
expérience HMBC. La corrélation la plus intéressante est celle qui indique la liaison glycosidique.
Spectrométrie de masse
O
59
H
C4 La spectrométrie de masse est une technique d’analyse complémentaire à la RMN, aux
applications variées et qui n’a vu son champ d’utilisation s’étendre aux macromolécules que
depuis peu de temps. Cette technique était employée à l’origine pour caractériser les éthers
méthyliques résultant des expériences de perméthylation, la position des groupements
méthyle de chaque monosaccharide issu d’une hydrolyse acide étant caractéristique des
liaisons entre monomères. Mais ce résultat ne permet pas d’accéder à la séquence
oligosaccharidique.
Même si la méthode est destructive pour l’échantillon, la spectrométrie de masse
présente l’avantage de ne nécessiter que de très faibles quantités de matériel (10 à 1000 fois
moins que pour la RMN). La clé de l’analyse des oligosaccharides par spectrométrie de masse
réside dans le choix de la technique d’ionisation.
HO
HO
H
H
H
O
OH
H
OH