Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

I.3.2.b. Séparation des oligosaccharides
La séparation des mélanges d’oligosaccharides après hydrolyse est certainement
l’étape la plus fastidieuse de l’étude structurale d’un polysaccharide. Les fractions
oligosaccharidiques peuvent être séparées par chromatographie d’exclusion stérique en
fonction de leur masse moléculaire ou plus exactement en fonction de leur volume
hydrodynamique ; d’autres méthodes de séparation sont liées à la charge des molécules
(chromatographie d’échange d’ions), à leur polarité (chromatographie en phase inverse), et
plus rarement à leur structure (chromatographie d’affinité).
I.3.2.c. Méthodes spectroscopiques et détermination structurale
des oligosaccharides
Les méthodes précédemment décrites permettent l’obtention d’oligosaccharides plus
faciles à analyser par spectroscopie.
Infrarouge
La spectroscopie infrarouge est une méthode d'analyse physique rapide, simple à
mettre en œuvre et ne nécessitant que peu de quantité de matière à analyser. Basée sur les
transitions entre les états vibrationnels et rotationnels d'une molécule, elle peut être employée
tout aussi facilement sur des échantillons bruts ou purifiés. Certains groupements ou liaisons,
considérés comme marqueurs (fonction C=O des acides uroniques, liaisons C=C
aromatiques), peuvent révéler la présence de catégories de polysaccharides (hémicelluloses,
pectines, lignines). A titre d’exemple, des bandes vers 1510 et 1595 cm -1 sont caractéristiques
des cycles aromatiques de la lignine et les bandes δ(CH2) à 1250 et 1465 cm -1 sont
caractéristiques des xylanes.
Spectroscopie de résonance magnétique nucléaire (RMN)
La spectroscopie RMN permet de déterminer la structure primaire complète d’une
chaîne oligosaccharidique. Elle mène en outre à l’identification de chacun des
monosaccharides et précise l’enchaînement des monomères, les points de branchement et les
anoméries.
Le spectre RMN monodimensionnel du proton donne des informations primaires sur la
valeur des déplacements chimiques des protons identifiables et permet de les comparer avec
ceux déjà décrits dans les banques de données. Il renseigne également sur le nombre de
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