Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...
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I.3.2.a. Hydrolyse <strong>de</strong>s liaisons glycosidiques<br />
Le découpage partiel <strong>de</strong>s polymères à <strong>de</strong>s fins analytiques nécessite l’hydrolyse <strong>de</strong>s<br />
liaisons glycosidiques. Nous présentons ici différentes métho<strong>de</strong>s possibles.<br />
Hydrolyse enzymatique<br />
Les métho<strong>de</strong>s les plus efficaces sont naturellement celles qui font appel aux enzymes<br />
spécifiques qui vont perm<strong>et</strong>tre l’obtention d’unités <strong>de</strong> répétition plus facilement analysables.<br />
Ce mo<strong>de</strong> <strong>de</strong> préparation est particulièrement bien adapté à <strong>de</strong>s polymères homogènes tels que<br />
les glucuronoxylanes (GX) qui sont composés d’enchaînements homogènes <strong>de</strong> résidus D-<br />
Xylp. La dégradation complète <strong>de</strong>s GX en monomères nécessite l’action combinée d’endo- ou<br />
d’exoenzymes qui non seulement hydrolysent les liaisons au sein <strong>de</strong> la chaîne principale, mais<br />
également libèrent les constituants <strong>de</strong>s chaînes latérales. L’ensemble <strong>de</strong>s activités nécessaires<br />
à la rupture <strong>de</strong>s liaisons <strong>de</strong> la chaîne principale est regroupé sous le terme général <strong>de</strong><br />
xylanases alors que celles qui éliminent les chaînes latérales sont parfois appelées enzymes<br />
accessoires 142 (Figure 36). Les xylanases sont très largement répandues dans tous les<br />
compartiments du mon<strong>de</strong> vivant, notamment <strong>de</strong>s microorganismes (bactéries, levures <strong>et</strong><br />
champignons). Les endoxylanases (1,4-β-D-xylane-4-xylanohydrolase, E.C. 3.2.1.8) rompent<br />
la liaison β-(1→4) à l’intérieur <strong>de</strong> la chaîne principale <strong>de</strong> xylane. Elles libèrent <strong>de</strong>s<br />
oligomères linéaires ou substitués <strong>de</strong> fort, puis <strong>de</strong> faible DP. Les spécificités <strong>de</strong><br />
reconnaissance <strong>de</strong>s sites <strong>de</strong> coupure <strong>de</strong>s endoxylanases sont multiples <strong>et</strong> variables selon les<br />
sources. La majorité <strong>de</strong>s endoxylanases décrites dans la littérature sont capables d’hydrolyser<br />
une liaison dans un environnement non substitué. C<strong>et</strong>te règle générale a pourtant <strong>de</strong>s<br />
exceptions. Citons, à titre d’exemple, une endoxylanase purifiée <strong>de</strong> Bacillus subtilis qui<br />
reconnaît un résidu aci<strong>de</strong> glucuronique latéral <strong>et</strong> hydrolyse la liaison β-(1→4)-xylosyl du<br />
xylose non substitué adjacent. Elle est ainsi désignée sous le terme <strong>de</strong> glucuronoxylane<br />
xylanohydrolase. 143 Les xylosidases (1,4-β-D-xylane-4-xylohydrolase, E.C. 3.2.1.37)<br />
hydrolysent <strong>de</strong> p<strong>et</strong>its oligomères libérés par les endoxylanases, en xylose monomère. Dans le<br />
cas <strong>de</strong>s GX, les enzymes accessoires impliquées dans la libération <strong>de</strong>s substituants sont <strong>de</strong><br />
<strong>de</strong>ux types. Les glucuronidases (xylane-α-D-1,2-glucuronohydrolase, E.C. 3.2.1.131) libèrent<br />
l’aci<strong>de</strong> glucuronique ou son dérivé méthylé, l’aci<strong>de</strong> 4-O-méthylglucuronique, fixés sur la<br />
chaîne <strong>de</strong> xylane par une liaison α-(1→2). 144 Leur action se conjugue à celle <strong>de</strong>s<br />
endoxylanases strictes pour l’hydrolyse totale <strong>de</strong>s xylanes. Les xylanes acétylestérases (E.C.<br />
3.2.1.6) sont encore peu décrites dans la littérature. Elles sont capables <strong>de</strong> libérer <strong>de</strong> l’aci<strong>de</strong><br />
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