Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

HO
HO
OH
O
OH
OMe
49
OSi(CH 3 ) 3
F 3 C NSi(CH 3 ) 3
Pyridine, 20°C, 2h sous argon
(H 3 C) 3 SiO
(H 3 C) 3 SiO
Figure 34 : Méthode de triméthylsilylation des O-méthylglycosides, d’après Kamerling et al., 128
OSi(CH 3 ) 3
I.3.1.c. Détermination du taux et de la localisation de l’acétylation
A l’état natif, les xylanes sont naturellement acétylés et l’analyse par IR du polymère
confirme cette acétylation par la présence d’une bande carbonyle intense à 1745 cm -1 .
Plusieurs méthodes mises en œuvre pour la détermination du taux d’acétylation sont décrites
dans la littérature. La technique la plus largement utilisée est la RMN du proton. Les signaux
à 2,0 ppm indiquent que les polysaccharides sont acétylés. 94, 105 Pour Grondalh et al., 137 le
degré d’acétylation DSAc est déterminé selon la formule suivante :
La RMN 1 H et 13 C permet aussi de préciser la position de l’acétyle et d’établir le
105, 138,
pourcentage de xylane non acétylé, de 2-O-acétylé, 3-O-acétylé et de 2,3-di-O-acétylés.
139 Le recours à des techniques en deux dimensions homonucléaire et hétéronucléaire permet
de confirmer et d’affiner les structures acétylés.
Le taux d’acétylation peut également être déterminé par HPLC après une saponification
par de la soude à 0,4 M à température ambiante pendant 3h30 140 ou une hydrolyse des
groupes acétyles par de l’acide oxalique à 0,5 M. 139 C’est alors l’acide acétique libéré qui est
dosé.
DSAc =
Σ (intégrations des protons des acétyles à 2.0 ppm) x 6
Σ (intégrations des protons du glucide entre 3.2 et 5.6 ppm) x 3
Une autre méthode repose sur le dosage enzymatique qui permet de doser des
quantités d’acide acétique de l’ordre de quelques µmoles contre quelques mmoles dans le cas
du dosage par HPLC. Cette méthode est basée sur le suivi de la réduction du NAD + en NADH
par spectrophotométrie à 340 nm (Figure 35). Après saponification des MGX, l’acide acétique
libéré est converti en acétyl-CoA en présence de l’enzyme acétyl-CoA synthétase (ACS),
d’adénosine-5’-triphosphate (ATP) et de coenzyme A (CoA) (1). L’acetyl-CoA réagit ensuite
avec de l’oxaloacétate pour former de l’acide citrique en présence de citrate synthase (CS) (2).
L’oxaloacetate utilisé pour la réaction (2) est formé à partir de L-malate et de nicotinamide-
adénine dinucléotide (NAD + ) en présence de L-malate déshydrogénase (L-MDH) (3). Au
cours de cette réaction, NAD + est réduit en NADH.
O
OMe
OSi(CH3 ) 3