Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

La chromatographie en phase gazeuse est une technique d’analyse rapide, qui du fait
de sa grande sensibilité, et de sa capacité à séparer des mélanges complexes se révèle être la
technique la plus adaptée à l’analyse qualitative et quantitative des méthylglycosides
triméthylsilylés des résidus et extraits végétaux. L’analyse des monosaccharides par
chromatographie en phase gazeuse nécessite au préalable la dérivatisation des
méthylglycosides en composés plus volatils. Pour cela, les techniques de dérivatisation sont
nombreuses (Tableau 3). Les méthodes les plus courantes sont la pertriméthylsilylation des
monosaccharides (ou de leur méthylglycosides) et la réduction des monosaccharides en
alditols par le borohydrure de sodium suivie de leur acétylation par l’anhydride acétique en
présence de N-méthylimidazole. Les dérivés aldonitriles acétates et trifluoroacétates ont été
également couramment décrits et les méthyloximes acétates sont parfois employés. Les
produits volatils obtenus sont ensuite séparés sur colonnes capillaires puis détectés par CPG
équipée d'un détecteur à ionisation de flamme (FID). Les phases stationnaires utilisées pour la
séparation des dérivés glucidiques sont apolaires et greffées par des dérivés siloxanes.
Tableau 3 : Méthode de dérivation des monosaccharides
Méthodes de dérivation Dérivé Références
Pertriméthylsilylation TMS Bleton et coll., 129
Acétylation acétates Biermann 130
Trifluoroacétylation trifluoroacétates Englmaier 131
Réduction/acétylation alditols acétates Black and Fox 132
Oximation/acétylation aldonitriles acétates McGinnis 133
O-méthyloximation/acétylation ou
triméthylsilylation
O-méthyloxime acétates ou Ométhyloxime
TMS
47
Neeser and Schweizer 134
En fonction de la méthode d'analyse sélectionnée, les oses seront observés sous la forme d'un
ou plusieurs pics. En effet, en solution, les oses existent en équilibre dynamique entre leurs
formes cycliques et ouvertes. Lors de l’équilibre mutarotationnel, deux anomères α et β
peuvent être formés pour chacune des formes furanose et pyranose (Figure 33). Ainsi, jusqu’à
quatre isomères peuvent être observés par monosaccharide.