Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

corriger les interférences des acides uroniques dans le dosage des oses totaux et
réciproquement.
Dosage des oses réducteurs
Le pouvoir réducteur des glucides peut être déterminé par la méthode de Somogyi 123
ou par celle à l’acide parahydroxybenzoïque hydrazide (PAHBAH) de Lever 124 décrite dans la
partie expérimentale. Le principe des dosages y est également détaillé. Le rapport des
quantités des oses totaux et des oses réducteurs donne la valeur du degré de polymérisation
(DP).
I.3.1.b. Composition monosaccharidique
Pour déterminer la composition osidique d’un polysaccharide, on opère le plus souvent
par séparation et détection des monomères constitutifs après leur hydrolyse. La méthode
utilisée pour rompre les liaisons glycosidiques doit permettre l’hydrolyse complète des
liaisons tout en préservant les monomères obtenus de toute dégradation secondaire. Les
monosaccharides libérés sont ensuite analysés avec ou sans dérivation préalable aussi bien en
HPLC (chromatographie liquide haute pression) que par CPG (chromatoraphie en phase
gazeuse) ou CLG (chromatographie liquide gaz).
Hydrolyse des liaisons glycosidiques
Le principe consiste à hydrolyser l’échantillon à analyser par un acide. La
dépolymérisation peut être conduite avec des acides de forces et de concentrations variables
sous diverses conditions opératoires (température, temps de réaction) selon la nature et la
structure du polysaccharide. En effet, les différents types de liaisons osidiques présentent des
taux d’hydrolyse variables en fonction de la stabilité relative des liaisons (1,6' > 1,4' > 1,3'
>1,2'). De même, la nature des liaisons glycosidiques entre deux unités osidiques contiguës
présente une différence de stabilité par rapport au cas usuel de deux unités glucosidiques liées
en 1,4'. Les liaisons glycosidiques entre une unité osidique et une autre unité portant un
groupement carboxylique ou amine seront plus difficiles à rompre que des liaisons entre un
ose et un autre sous la forme furanose, anhydro ou déoxy. Des acides minéraux forts peuvent
être par exemple employés à chaud pour l’étude des dérivés cellulosiques mais, en raison des
dégradations non spécifiques inhérentes à la force de l’acide, l’acide trifluoroacétique est
préféré à l’acide sulfurique. Il présente de plus l’avantage d’être simplement éliminé par co-
évaporation avec du méthanol.
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