Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...
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avec un coton-tige, celles qui ont migré sur la fibronectine (face externe <strong>de</strong>s inserts) sont<br />
fixées pendant 10 minutes au méthanol, puis colorées au crystal viol<strong>et</strong>. Les cellules sont<br />
comptées au microscope (Zeiss Axiophot). L’ensemble <strong>de</strong>s cellules est dénombré<br />
(grossissement X200) <strong>et</strong> les pourcentages <strong>de</strong> migration sont déterminés en comparant le<br />
nombre <strong>de</strong> cellules pré-traitées qui ont migré (Ntraitées) au nombre <strong>de</strong> cellules non traitées qui<br />
ont migré (Nnon traitées). Ainsi :<br />
%Migration = (Ntraitées/Nnon traitées)x100<br />
100 μ L Fibronectine (100<br />
μ g/ml) pendant 24 h à 4 ° C)<br />
Insert<br />
500 μl milieu<br />
à 10 % SVF<br />
3 Rinçages PBS<br />
Blocage 1 % BSA<br />
dans 1 H<br />
Membrane PET 8 μ m<br />
Figure 84 : Principe <strong>de</strong> la migration <strong>et</strong> <strong>de</strong> l’invasion cellulaires en chambre <strong>de</strong> Boy<strong>de</strong>n<br />
V.1.2.d. Invasion cellulaire<br />
Les cellules non traitées sont déposées dans les inserts recouverts par le Matrigel à<br />
raison <strong>de</strong> 10.10 4 cellules.500 µL -1 par insert dans du milieu 0,1 % <strong>de</strong> BSA contenant<br />
différentes concentrations <strong>de</strong> xylanes <strong>de</strong> châtaignier <strong>et</strong> d’argan <strong>et</strong> d’homoxylanes d’argan.<br />
Comme précé<strong>de</strong>mment, du milieu à 10 % <strong>de</strong> SVF est placé dans les puits <strong>de</strong> la plaque<br />
companion (500 µL par puits). Après 24 h d’invasion dans l’incubateur à 37 °C, les inserts<br />
sont récupérés <strong>et</strong> les cellules ayant traversé le Matrigel sont lavées, fixées, colorées <strong>et</strong><br />
comptées comme décrit pour l’étu<strong>de</strong> <strong>de</strong> la migration. Des pourcentages d’invasion cellulaire<br />
sont calculés <strong>de</strong> la même manière que les pourcentages <strong>de</strong> migration.<br />
182<br />
CellulesA 431 (30 000 dans<br />
250 μ l <strong>de</strong> milieu avec 0.1 % BSA)<br />
Plaque companion (24 puits)<br />
- incubation 20 h à 37 ° C<br />
- grattage <strong>de</strong>s inserts au<br />
coton tige<br />
- Fixation 5 minutes<br />
paraformald é hy<strong>de</strong> 4 %<br />
- Rin ç age à l ’ eau<br />
- Coloration à l ’ Hemalun<br />
pendant 5 minutes