Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

avec un coton-tige, celles qui ont migré sur la fibronectine (face externe des inserts) sont
fixées pendant 10 minutes au méthanol, puis colorées au crystal violet. Les cellules sont
comptées au microscope (Zeiss Axiophot). L’ensemble des cellules est dénombré
(grossissement X200) et les pourcentages de migration sont déterminés en comparant le
nombre de cellules pré-traitées qui ont migré (Ntraitées) au nombre de cellules non traitées qui
ont migré (Nnon traitées). Ainsi :
%Migration = (Ntraitées/Nnon traitées)x100
100 μ L Fibronectine (100
μ g/ml) pendant 24 h à 4 ° C)
Insert
500 μl milieu
à 10 % SVF
3 Rinçages PBS
Blocage 1 % BSA
dans 1 H
Membrane PET 8 μ m
Figure 84 : Principe de la migration et de l’invasion cellulaires en chambre de Boyden
V.1.2.d. Invasion cellulaire
Les cellules non traitées sont déposées dans les inserts recouverts par le Matrigel à
raison de 10.10 4 cellules.500 µL -1 par insert dans du milieu 0,1 % de BSA contenant
différentes concentrations de xylanes de châtaignier et d’argan et d’homoxylanes d’argan.
Comme précédemment, du milieu à 10 % de SVF est placé dans les puits de la plaque
companion (500 µL par puits). Après 24 h d’invasion dans l’incubateur à 37 °C, les inserts
sont récupérés et les cellules ayant traversé le Matrigel sont lavées, fixées, colorées et
comptées comme décrit pour l’étude de la migration. Des pourcentages d’invasion cellulaire
sont calculés de la même manière que les pourcentages de migration.
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CellulesA 431 (30 000 dans
250 μ l de milieu avec 0.1 % BSA)
Plaque companion (24 puits)
- incubation 20 h à 37 ° C
- grattage des inserts au
coton tige
- Fixation 5 minutes
paraformald é hyde 4 %
- Rin ç age à l ’ eau
- Coloration à l ’ Hemalun
pendant 5 minutes