Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

Préparation des inserts pour l’invasion
Pour l’étude de l’invasion cellulaire, l’intérieur des inserts (déposés dans les puits de la
plaque companion) est recouvert par 100 µL de Matrigel à 10 mg.mL -1 PBS (Becton
Dickinson). La plaque de culture est alors placée dans l’incubateur à 37 °C pendant 3 heures,
puis sous une hotte à flux laminaire (12 à 24 heures) pour permettre la polymérisation du
Matrigel. Les inserts sont stockés à 4 °C puis réhydratés 24 heures avant l’expérience avec
500 µl de milieu.
Préparation des cellules pour la migration
Les cellules A431 sont ensemencées dans des tubes Falcon T25 à raison de 1.7.10 6 -2.10 6
cellules.5 mL -1 par T25 dans du milieu de culture à 10 % de SVF. Après 24 h, les cellules sont
rincées au PBS puis traitées par des solutions à 50 ou 100 µM des xylanes (dilution dans du
milieu à 10% de SVF) pendant 24 h. Des cellules, servant de témoins, ne sont pas traitées
(milieu 10 % SVF). Après les traitements par les différents lots de xylanes, les cellules sont
rincées au PBS, détachées à la trypsine, puis comptées. Elles sont alors diluées dans du milieu
dépourvu de sérum mais additionné de 0,1 % de BSA.
Préparation des cellules pour l’invasion
Les cellules ne sont pas pré-traitées mais sont placées simultanément au contact de
solutions à 50 ou 100 µM de xylanes dans les inserts.
Migration cellulaire
Les cellules pré-traitées et non traitées (témoins) sont déposées dans les inserts recouverts
de fibronectine à raison de 10.10 4 cellules.500 µL-1 par insert dans du milieu 0,1 % de BSA.
Du milieu à 10 % de SVF est placé comme chémoattractant dans les puits de la plaque
companion (500 µL par puits), afin de permettre la formation d’un gradient chimiotactique de
part et d’autre de la membrane poreuse (Figure). Après 24 h de migration dans l’incubateur à
37 °C, le surnageant est éliminé et les inserts sont rincés au PBS sur chaque face. Les cellules
n’ayant pas migré au travers des pores (face interne des inserts) sont éliminées par grattage
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