Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

Chapitre V.
V.1. Evaluation des propriétés biologiques de cytotoxicité
des extraits
Les tests de cytotoxicité ont été réalisés au Laboratoire d’Oncologie Cellulaire et
Moléculaire (EA 3410) de l’Université de Paris XIII avec la collabration du professeur
Michel Kraemer et l’assistance technique de Mme Odile Sainte Catherine.
V.1.1. Efficacité des xylanes en oncologie cellulaire et moléculaire
V.1.1.a. Lignée cellulaire
Les études ont été menées sur des cellules de la lignée tumorale A431 provenant de
l’ATCC (American Type Collection Culture). Cette lignée d’un carcinome épidermoïde
vulvaire humain se caractérise par une morphologie de cellules épithéliales et un grand
nombre de récepteurs à l’EGF 239 . Par ailleurs, ces cellules sécrètent une quantité importante
de VEGF (facteur de croissance endothélial vasculaire), favorisant l’angiogénèse
(L'angiogenèse est un mécanisme de néovascularisation prenant naissance à partir d'un réseau
capillaire préexistant. Elle est particuliérement importante et indispensable en particulier pour
la croissance des tumeurs, le développement des métastases). 240
V.1.1.b. Entretien cellulaire
La lignée cellulaire est cultivée dans un milieu de culture DMEM (4500 mg.mL -1 de
glucose, pyruvate de sodium et glutaMAX), enrichi de 10 % de sérum de veau fœtal (SVF)
décomplémenté et contenant un mélange d’antibiotiques (50 UI.mL -1 de péniciline, 50 µg.mL -
1 de streptomycine) (Invitrogen). Les cellules sont ensemencées dans des tubes Falcon T75 à
raison de 5.10 5 à 10 6 cellules.10 mL -1 de milieu de culture et maintenues en culture dans un
incubateur à 37°C et 5% de CO2 en atmosphère humide. A confluence, les cellules sont
rincées avec une solution saline de phosphate tamponnée (PBS : Gibco) puis détachées par
une solution de trypsine-EDTA (0,0025% de trypsine, 0,01% d’EDTA ; Invitrogen) et
reensemencées au 1/10 ème de la confluence dans de nouvelles boites de culture. Chaque
trypsination correspond à un passage numéroté.
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