Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

phosphotungstate. Ces derniers sont réduits par réaction avec les composés phénoliques sous
l’effet de la chaleur en milieu alcalin pour former un produit bleu. La concentration de ce
dérivé coloré est déterminée par spectrophotométrie à une longueur d’onde de 760 nm. Des
solutions d’acide gallique de concentrations croissantes sont utilisées comme étalon.
Un millilitre d’extrait brut après délignification enzymatique est mélangé à 2,5 mL de
réactif de Folin-Ciocalteu dilué 10 fois par de l’eau ultra-pure. Le mélange est aussitôt
additionné de 2 mL d’un solution de bicarbonate de sodium à 75 g.L -1 puis placé au bain-
marie à 50°C pendant 5 minutes avant d’être placé dans un bain d’eau froide. Les mesures
d’absorbance sont effectuées au spectromètre UV-visible (Shimadzu) à 760 nm. Les
concentrations en hydroxyles phénoliques sont estimées par référence à une droite étalon
d’acide gallique de concentrations comprises entre 20 et 100 mg.L -1 . Les résultats sont
exprimés en équivalents massiques d’acide gallique.
III.2.3. Dosage du peroxyde d’hydrogène résiduel
Un prélèvement d’un volume V de 1 mL du mélange réactionnel est introduit dans un
bécher de 100 mL et mélangé à 25 mL d’une solution de tampon phosphate KH2PO4-
Na2HPO4 500 mM (pH 7). On y ajoute une spatule d’empois d’amidon et 5 mL d’une solution
d’iodure de potassium (0,4 M) fraichement préparée. L’iode libéré est titré avec une solution
de tiosulfate de sodium (0,01 M) placée dans une burette graduée. Les équilibres mis en jeu
dans ce dosage sont :
H2O2 + 2 I - + 2 H3O + I2 + 4 H2O (1)
2 S2O3 2- + I2 2 I - + S4O6 2- (2)
La quantité de peroxyde d’hydrogène résiduelle (nH2O2) contenu dans le mélange réactionnel
se calcule, d’après les équilibres (1) et (2) par la formule :
nH2O2 = ½ x Véq x 0,01 x Vtot/V
avec Véq, le volume de thiosulfate de sodium versé jusqu’à la décoloration de la solution et
Vtot le volume total de la solution à doser.
III.2.4. Dosage des fonctions acides carboxyliques
Un prélèvement d’une masse de 20 mg d’échantillon est mis en solution dans 50 mL
d’eau distillée auxquels est ajouté 1 mL de soude 0,1 M. L’excès de soude est dosé par HCl
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