Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

puis on ajoute 20 µL d’une solution de MHDP (méta-hydroxydiphényle) à 0,15 % dans
NaOH 0,5 %. Les contenus des tubes sont homogénéisés au vortex, une coloration rose
apparaît. Les densités optiques sont par la suite mesurées à 520 nm.
Les concentrations relatives en oses neutres et en acides uroniques des solutions
polysaccharidique sont obtenues en utilisant la méthode de calcul décrite par Montreuil et
Spik 136 qui permet d’éliminer les interférences des acides uroniques dans le dosage des oses
neutres et réciproquement.
Principe du dosage des acides uroniques par la méthode de Blumenkrantz et Asboe-Hansen 121
H
HO
H
H
CHO
OH
H
OH
OH
COOH
OH
COOH
OH
Dosage des oses réducteurs
Les solutions de polysaccharides à doser sont préparées simultanément avec une gamme
étalon composée de solutions de xylose à 10, 25 et 50 µg.mL -1 . A 333 µL de solution à doser,
on ajoute 1000 µL d’une solution de PAHBAH (acide hydrazide para-hydroxybenzoïque) à
5 % dans HCl 0,5 M, fraîchement dilué au 1/5 par NaOH 0,5 M. Le mélange est homogénéisé
au vortex et porté à 100°C au bain-marie durant 5 minutes, puis refroidi. La lecture des
densités optiques est réalisée à 410 nm.
O
OH
OH
164
Déshydratation
H 2SO 4
100°C
HOOC
MHDP
O
O
OH
O
O
CH 2OH
CH 2OH
Chromophore qui absorbe
à 520 nm