Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

Dosage des oses totaux
Les solutions de polysaccharides à doser, de concentrations comprises entre 5 et
100 µg.mL -1 ainsi que des solutions de xylose et d’acide glucuronique constitutives de la
gamme étalon sont préparées simultanément. A 200 µL des solutions à doser ou de gamme
étalon, on ajoute 200 µL d’une solution aqueuse de phénol à 5 %. Le mélange est
homogénéisé au vortex et 1mL d’acide sulfurique concentré est rapidement introduit à la
pipette dans le milieu réactionnel. Après homogénéisation au vortex, le mélange est porté au
bain-marie à 100°C durant 5 minutes. Les tubes sont refroidis dans un bain de glace et placés
30 minutes à l’obscurité. Les densités optiques sont par la suite mesurées à 492 nm sur un
spectrophotomètre UV-visible.
H
HO
H
CHO
Principe du dosage des oses neutres par la méthode de Dubois et al., 120
OH
H
OH
CH 2OH
OH
OH
Dosage des acides uroniques
O
OH
OH
Les solutions de polysaccharides à doser sont préparées simultanément avec une
gamme étalon composée de solutions d’acide glucuronique à 25, 50 et 100 µg.mL -1 et de
xylose à 50, 100, 200 µg.mL -1 . A 200 µL des solutions à doser, on ajoute 1,2 mL d’une
solution de tétraborate de sodium à 0,0125 M dans de l’acide sulfurique concentré. Le
mélange est homogénéisé au vortex puis refroidi dans de la glace. Les tubes sont ensuite
portés à 100°C au bain-marie durant 5 minutes. Les tubes sont refroidis dans un bain de glace
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Déshydratation
H 2SO 4
100°C
H
O
Phénol
C
OH
O
O CH
H 2O
O
Chromophore qui absorbe
à 492 nm