Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

d’éthanol à 80% à 80°C pendant 7 h. Le résidu obtenu (RSox) est alors refroidi à température
ambiante avant d’être mis à sécher une nuit à l’étuve à 40°C.
III.1.3.c. Extraction des pectines
Le mode opératoire est le même que celui décrit dans III.1.1.c.
III.1.3.d. Délignification chimique par le chlorite de sodium
Le mode opératoire est le même que celui décrit dans III.1.1.d.
III.1.4. Extraction alcaline des xylanes
Deux grammes d’holocellulose de péricarpe d’argan sont ajoutés à 100 mL d’une
solution de KOH 4,3 M à 3 mg.mL -1 de NaBH4 (agent réducteur). L’enceinte d’extraction est
saturée à l’argon pour prévenir tout risque de dégradation du produit, puis placée sous
agitation magnétique à température ambiante pendant 24h. A la fin de la réaction, la
suspension est filtrée et le résidu est rincé à l’eau distillée puis lyophilisé. Le pH du filtrat est
porté à 5,5 par ajout d’acide acétique glacial. Il est ensuite placé en dialyse 48h dans une
membrane Spectrapor dont le seuil de coupure est compris entre 6000 et 8000 Da. A la fin de
la dialyse, la solution est centrifugée de façon à séparer la fraction insoluble (contenant
l’homoxylane) de la fraction soluble (qui contient le 4-O-méthylglucuronoxylane). Après
concentration de cette dernière fraction, les hémicelluloses de la fraction soluble sont
précipitées par 3 volumes d’éthanol puis centrifugées pendant 20 minutes à 1860 g (2000
rpm). Le surnageant éthanolique est éliminé et le culot est repris dans de l’eau distillée.
III.2. Caractérisations chimique des xylanes
III.2.1. Etude de la composition centésimale
III.2.1.a. Dosage des oses
L’appréciation de la quantité en oses neutres et en acides uroniques présents dans les
polysaccharides repose sur 2 dosages complémentaires :
- le dosage des oses totaux par la méthode de Dubois et al., 120 ,
- le dosage des acides uroniques par la méthode de Blumenkrantz et Asboe-Hansen 121 .
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