Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

III.1.1.b. Extraction à l’éthanol
Cette première étape permet d’éliminer les sucres circulants et les tannins solubles.
L’extraction a été réalisée à partir de 45 g de sciures de châtaignier préalablement tamisées à
500 µm dans 900 mL d’éthanol à 80% à 80°C pendant 7 h. Le résidu obtenu (RSox) est alors
refroidi à température ambiante avant d’être mis à sécher une nuit à l’étuve ventilée à 40°C.
III.1.1.c. Extraction des pectines
RSox est dépectinisé dans 1,6 L d’oxalate d’ammonium à 1% à 80°C pendant 2 h. La
solution est refroidie à température ambiante avant d’être filtrée sur verre fritté de porosité 3.
Le résidu RDép est, quant à lui, rincé à l’eau distillée.
III.1.1.d. Délignification chimique par le chlorite de sodium
De façon à extraire les hémicelluloses plus facilement, la délignification de RDép est
essentielle. Elle est réalisée à partir de RDép placé dans 1,6 L d’une solution acide de chlorite
de sodium (0,47 g/g de sciures brutes + 0,2 mL l’acide acétique glacial par g de sciures
brutes). La solution est portée à 80°C pendant 1h, refroidie à température ambiante et filtrée
sur verre fritté de porosité 3. Le résidu est rincé à l’eau distillée jusqu’à neutralisation du
filtrat. Pour une meilleure délignification et donc une plus grande pureté de l’holocellulose
(RHolo), le protocole est renouvelé.
III.1.1.e. Délignification enzymatique par le système
laccase/HOBt/O2
Cette étape est réalisée sur 2 g de sciures ou d’holocellulose et placées dans 100 mL
d’une solution tampon d’acétate de sodium à 50 mM ajustée à pH 5,5 (par de l’acide acétique
glacial dilué), en présence de la laccase et du médiateur HOBt à 2 % (40 mg). La réaction se
déroule sous atmosphère de dioxygène sous agitation magnétique, et à des temps (1 à 4 h) et
des températures (25°C à 45°C) variables. A la fin de la réaction, l’enzyme est inactivée par
chauffage à 100°C pendant quelques dizaines de secondes et la solution est filtrée.
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