Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

More documents

Recommendations

Info

II.1.2.b. Chromatographie en phase gazeuse Un système Perichrom PR-2100 a été utilisé pour l'analyse des méthylglycosides triméthylsilylés. Il est équipé d’une colonne capillaire CP-SIL-5CB (Chrompack ; L = 50 m, Øint = 0,32 mm ; phase : diméthylpolysiloxane) et d’un détecteur à ionisation de flamme (FID). Le gaz vecteur est l’azote sous pression de 75 kPa. La température de l’injecteur et du détecteur est fixée à 260°C. Le chromatographe est piloté par ordinateur et les chromatogrammes traités par le logiciel Winilab v.3 de Perichrom. II.1.2.c. Chromatographie basse pression sur Biogel P2 Les séparations par chromatographie d’exclusion stérique sur colonne en basse pression, ont été réalisées sur colonnes de Biogel P2. Les colonnes sont équilibrées dans le système d’élution. L’élution se fait grâce à une pompe péristatique dont le débit est fixé à 10 mL.h -1 et les différentes fractions sont recueillies à l’aide d’un collecteur (Redifrac ; Pharmacia-Biotech.). II.1.2.d. Chromatographie liquide haute pression (HPLC) Les profils HPLC des masses moléculaires sont obtenus à l’aide d’un système HPLC (Dionex P-680), équipé de deux colonnes d’exclusion stérique PL-aquagel-OH mixed 8 µm (Polymers Laboratories-300*7,5mm). L’équilibrage se fait dans l’eau ultrapure (Millipore) à un débit de 1 mL.min -1 . Ce système est complété par un détecteur à indice de réfraction Shodex (RI-101). Chapitre III. III.1. Extraction des xylanes A. Xylanes de sciures de châtaignier III.1.1. Préparation de l’holocellulose III.1.1.a. Matériel biologique Les sciures utilisées pour nos expérimentations sont des sciures de châtaignier, arbre appartenant à la catégorie des bois durs. Elles nous ont été fournies par l’établissement Mazières de la Chapelle Montbrandeix (87). Ces sciures ont été séchées à l’étuve ventilée durant trois jours à la température de 50°C. Elles ont par la suite été broyées puis tamisées (à 200 et 500 µm) afin de faciliter l’extractabilité des hémicelluloses qu’elles renferment. 158
III.1.1.b. Extraction à l’éthanol Cette première étape permet d’éliminer les sucres circulants et les tannins solubles. L’extraction a été réalisée à partir de 45 g de sciures de châtaignier préalablement tamisées à 500 µm dans 900 mL d’éthanol à 80% à 80°C pendant 7 h. Le résidu obtenu (RSox) est alors refroidi à température ambiante avant d’être mis à sécher une nuit à l’étuve ventilée à 40°C. III.1.1.c. Extraction des pectines RSox est dépectinisé dans 1,6 L d’oxalate d’ammonium à 1% à 80°C pendant 2 h. La solution est refroidie à température ambiante avant d’être filtrée sur verre fritté de porosité 3. Le résidu RDép est, quant à lui, rincé à l’eau distillée. III.1.1.d. Délignification chimique par le chlorite de sodium De façon à extraire les hémicelluloses plus facilement, la délignification de RDép est essentielle. Elle est réalisée à partir de RDép placé dans 1,6 L d’une solution acide de chlorite de sodium (0,47 g/g de sciures brutes + 0,2 mL l’acide acétique glacial par g de sciures brutes). La solution est portée à 80°C pendant 1h, refroidie à température ambiante et filtrée sur verre fritté de porosité 3. Le résidu est rincé à l’eau distillée jusqu’à neutralisation du filtrat. Pour une meilleure délignification et donc une plus grande pureté de l’holocellulose (RHolo), le protocole est renouvelé. III.1.1.e. Délignification enzymatique par le système laccase/HOBt/O2 Cette étape est réalisée sur 2 g de sciures ou d’holocellulose et placées dans 100 mL d’une solution tampon d’acétate de sodium à 50 mM ajustée à pH 5,5 (par de l’acide acétique glacial dilué), en présence de la laccase et du médiateur HOBt à 2 % (40 mg). La réaction se déroule sous atmosphère de dioxygène sous agitation magnétique, et à des temps (1 à 4 h) et des températures (25°C à 45°C) variables. A la fin de la réaction, l’enzyme est inactivée par chauffage à 100°C pendant quelques dizaines de secondes et la solution est filtrée. 159
Page 1:
UNIVERSITE DE LIMOGES Ecole Doctora
Page 5 and 6:
Remerciements Je remercie tout d’
Page 7:
Enfin, je remercie mes proches. Mer
Page 10 and 11:
I.5. Extraction par les micro-ondes
Page 12 and 13:
III.2.3. Dosage du peroxyde d’hyd
Page 14 and 15:
Tableau 22 : Résultats qualitatifs
Page 16 and 17:
Figure 30 : Dérivés furfuriques o
Page 18 and 19:
Figure 84 : Principe de la migratio
Page 20 and 21:
L-MDH : L-malate déshydrogénase M
Page 23 and 24:
La biomasse est une source abondant
Page 25:
Première partie : La paroi cellula
Page 28 and 29:
microfibrilles sont disposées en h
Page 30 and 31:
l’enchaînement est constitué d
Page 32 and 33:
C C C O OR OR OR β-Aryl éther (β
Page 34 and 35:
oligomères de faibles poids moléc
Page 36 and 37:
aussi dérivées de la phénylalani
Page 38 and 39:
des xylanes fortement liée à la l
Page 40 and 41:
I.1.2.d. Interactions entre les pol
Page 42 and 43:
Figure 9 : Possibles liaisons coval
Page 44 and 45:
Hydrosolubles Figure 10 : Séparati
Page 46 and 47:
explosion à la vapeur, ultrasons),
Page 48 and 49:
méthode est utilisée afin de cara
Page 50 and 51:
- La lignine-peroxydase (LiP) La li
Page 52 and 53:
En matière de délignification, la
Page 54 and 55:
Les protocoles de délignification
Page 56 and 57:
l’irradiation se faisant le plus
Page 58 and 59:
favorisent l’extraction des hexos
Page 60 and 61:
Xylane O OR R= Xylane OR OR O OH OH
Page 62 and 63:
principes actifs 112 et sont au moi
Page 64 and 65:
corriger les interférences des aci
Page 66 and 67:
a: formation du réactif C H 3 HO O
Page 68 and 69:
OH OH O OH OH α-D-xylopyranose < 1
Page 70 and 71:
1 CH3COOH -O O P O O O P O O O P O
Page 72 and 73:
acétique à partir d’un xylane d
Page 74 and 75:
la liaison glycosidique la plus lab
Page 76 and 77:
éactions de peeling tout en orient
Page 78 and 79:
ésidus monosaccharidiques par l’
Page 80 and 81:
Ionisation par MALDI Le MALDI (Matr
Page 82 and 83:
l’électrospray bénéficie d’u
Page 84 and 85:
lumière dispersée et la concentra
Page 86 and 87:
I.4.1.c. Propriétés nutritionnell
Page 88 and 89:
Additifs alimentaires Applications
Page 90 and 91:
(TMAHP) ou l’époxypropyltriméth
Page 92 and 93:
ains de bouches. 209 Le furfural, o
Page 95:
Deuxième partie : Nouvelles strat
Page 99 and 100:
Chapitre I. Délignification en mil
Page 101 and 102:
dernière remarque souligne la bonn
Page 103 and 104:
Essai (a) Les données de la litté
Page 105 and 106:
I.4.2.b. Etude de la composition sa
Page 107 and 108:
3 et 5,5 ppm) et l’intégration d
Page 109 and 110:
Chapitre II. Délignification enzym
Page 111 and 112:
extraction aqueuse. On aboutit alor
Page 113 and 114:
uniformément dans le domaine expé
Page 115 and 116:
Tableau 15 : Grille de dépouilleme
Page 117 and 118:
médiateur a un fonctionnement opti
Page 119 and 120:
La délignification par le chlorite
Page 121 and 122:
III.1. Synthèse des phtalocyanines
Page 123 and 124:
l’holocellulose), elles sont plus
Page 125 and 126:
d’hydrogène. Dans la plupart des
Page 127 and 128: acides uroniques. Cependant, il fau
Page 129 and 130: Figure 66 : Spectre RMN 1 H (D2O) d
Page 131 and 132: Tableau 22 : Résultats qualitatifs
Page 133 and 134: oxydation. Si globalement, les tene
Page 135 and 136: C-5 des unités de xylose non subst
Page 137 and 138: III.4. Bilan sur le système de dé
Page 139 and 140: spectrométrie de masse MALDI-TOF e
Page 141 and 142: utilisées comme indicateurs color
Page 143 and 144: Catalyseur H2TPPS AlPcS ZnPcS NiPcS
Page 145 and 146: atteignent généralement plus de 2
Page 147 and 148: Troisième partie : Quelques propri
Page 149 and 150: L’importance de certaines classes
Page 151 and 152: Chapitre I. Extraction, purificatio
Page 153 and 154: Péricarpe issu de Argania spinosa
Page 155 and 156: espectivement, les extraits KOH de
Page 157 and 158: passage sur une résine, le polymè
Page 159 and 160: châtaignier, respectivement non-im
Page 161 and 162: Figure 79 : Spectre RMN 1 H d’un
Page 163 and 164: Chapitre II. Evaluation des propri
Page 165 and 166: Control MGX C1 50μM MGX C1 5μM Fi
Page 167 and 168: Xylane L’ensemble des données co
Page 169 and 170: CONCLUSION GENERALE 149
Page 171 and 172: La fraction polysaccharidique non c
Page 173 and 174: Quatrième partie : Partie Expérim
Page 175 and 176: Chapitre I. I.1. Réactifs et solva
Page 177: II.1.1.c. Ultraviolet-Visible Les d
Page 181 and 182: heure. Après refroidissement de la
Page 183 and 184: Dosage des oses totaux Les solution
Page 185 and 186: Principe du dosage des oses réduct
Page 187 and 188: 0,02 M en utilisant une électrode
Page 189 and 190: par passage sur résine Amberlite I
Page 191 and 192: IV.1.2. 4,4’,4’’,4’’’-t
Page 193 and 194: IV.1.4. 4,4’,4’’,4’’’-t
Page 195 and 196: IV.1.6. 4,4’,4’’,4’’’-t
Page 197 and 198: IV.1.8. 5, 10, 15,20-tétra(4-sulfo
Page 199 and 200: Chapitre V. V.1. Evaluation des pro
Page 201 and 202: Préparation des inserts pour l’i
Page 203 and 204: Principe V.1.2.e. Zymographie L’a
Page 205 and 206: REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1. http
Page 207 and 208: 31. Das N. N., Das S. C., Sarkar A.
Page 209 and 210: and lignin peroxidase from Phaneroc
Page 211 and 212: 87. Kansal S. K., Singh M., Sud D.,
Page 213 and 214: 118. Jacobs A., Lundqvist J., Stalb
Page 215 and 216: 147. BeMiller J. N., Acid-catalysed
Page 217 and 218: 175. Stone A. L., Melton D. J., Lew
Page 219 and 220: 203. Zhang M., Zhang L., Cheung P.
Page 221 and 222: 231. d'Alessandro N., Tonucci L., M
Page 223 and 224: Annexes 203
Page 225 and 226: Annexe 1 Méthode de calcul de la c
Page 227 and 228: Conduite de Projet de recherche. Un
Page 229 and 230:
Cadre général et enjeux de la th
Page 231 and 232:
Gestion, évolution et coût du pro
Page 233 and 234:
Détails 213 Nombre d'unités Coût
Page 235 and 236:
l’anticipation et de la concertat
Page 238:
RESUME Extraction, caractérisation
show all

Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?