Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...
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II.1.1.c. Ultraviol<strong>et</strong>-Visible<br />
Les <strong>de</strong>nsités optiques <strong>de</strong>s dosages colorimétriques sont mesurées sur un<br />
spectrophotomètre UV-visible à double faisceau Shimadzu UV-1700 series. Elles sont<br />
effectuées dans <strong>de</strong>s cellules en polystyrène (PS) <strong>de</strong> 1 cm <strong>de</strong> traj<strong>et</strong> optique. Les spectres <strong>de</strong>s<br />
phtalocyanines <strong>et</strong> <strong>de</strong>s porphyrines synthétisées ont été réalisés sur un spectrophotomètre UV-<br />
visible Perkin Elmer Lamba 25 dans <strong>de</strong>s cellules <strong>de</strong> quartz <strong>de</strong> 1 cm <strong>de</strong> traj<strong>et</strong> optique à une<br />
concentration voisine <strong>de</strong> 10 -5 -10 -6 M dans l’eau. Les longueurs d’on<strong>de</strong> correspondantes aux<br />
absorbances maximales sont exprimées en nm <strong>et</strong> les coefficients d’absorption molaire ε, en<br />
mol -1 .L.cm -1 .<br />
II.1.1.d. Spectrométrie <strong>de</strong> masse MALDI-TOF<br />
Les spectres <strong>de</strong> masse MALDI-TOF <strong>de</strong>s oligosacchari<strong>de</strong>s ont été réalisés à la<br />
plateforme <strong>de</strong> spectrométrie <strong>de</strong> masse <strong>de</strong> l’INRA <strong>de</strong> Nantes (UR 1268 BIA). Les échantillons<br />
hydrolysés ont été dissous dans l’eau à une concentration <strong>de</strong> 0,1 mg.L -1 . Les mesures ont été<br />
réalisées sur un spectromètre MALDI-LR (Waters, Manchester, UK) dont le laser ém<strong>et</strong> dans<br />
l’UV à 337 nm (fréquence 5 HZ) pour <strong>de</strong>ssorber <strong>et</strong> ioniser un mélange <strong>de</strong> matrice/échantillon<br />
co-cristallisé sur une surface métallique. La matrice utilisée est l’aci<strong>de</strong> 2,5-<br />
dihydroxybenzoique (DHB), dissoute à 5 mg.mL -1 dans 0,1% <strong>de</strong> TFA.<br />
Les spectres <strong>de</strong> masse MALDI-TOF <strong>de</strong>s porphyrines <strong>et</strong> <strong>de</strong>s phtalocyanines ont été effectués<br />
au Laboratoire <strong>de</strong> Chimie Structurale Organique <strong>et</strong> Biologique <strong>de</strong> l’Université <strong>de</strong> Paris VI par<br />
le Dr. Sandra Alves par désorption laser avec un spectromètre à temps <strong>de</strong> vol Voyager Elite.<br />
II.1.2. Chromatographie<br />
II.1.2.a. Chromatographie sur couche mince<br />
Des plaques <strong>de</strong> silice Kieselgel 60F254 <strong>de</strong> 0,2 mm d'épaisseur (Merck) ont été<br />
employées pour la chromatographie sur couche mince en phase normale. Dans le cas <strong>de</strong>s<br />
oligosacchari<strong>de</strong>s, une double migration est réalisée dans le système <strong>de</strong> solvants ternaire<br />
(butanol, aci<strong>de</strong> acétique, eau ; 2/1/1). Après évaporation <strong>de</strong> l'éluant, les plaques sont<br />
pulvérisées par une solution d’orcinol sulfurique (0,1 % d’orcinol dans <strong>de</strong> l’aci<strong>de</strong> sulfurique à<br />
20 %). Elles sont enfin placées 10 minutes à l'étuve à 100°C pour être révélées.<br />
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