Extraction, caractérisation chimique et valorisation biologique de ...

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Méso-innositol [87-89-8] 98% Acros MHDP [580-51-8] 90% Aldrich Molybdate d'ammonium [12054-85-2] p.a Sigma NaBH4 [16940-66-2] 98% Acros NaOH [1310-73-2] p.a. Acros NH4PF6 [16941-11-0] 99,5% Alfa Aesar Oxalate d'ammonium [6009-70-7] 98% VWR PABAH [5351-23-5] 97% Fluka Péroxyde d'hydrogène [7722-84-1] 35% Acros Phénol [108-95-2] 99% Acros Pyridine [110-86-1] 99,8% Aldrich Rose de Bangale [632-69-9] 90,0% Sigma Sulfate de fer [7782-63-0] p.a Acros Sulfate de manganèse [10034-96-5] p.a VWR Tétraborate de sodium [1303-96-4] 99% Sigma THF [109-99-9] 99,5% Carlos Erba Urée [57-13-6] 99% Acros Xylose [58-86-6] 99% Sigma Chapitre II. II.1. Analyse chimique II.1.1. Analyses spectroscopiques II.1.1.a. Infrarouge Les spectres infrarouge ont été réalisés à l'aide d'un spectromètre Perkin Elmer Spectrum 1310 à transformée de Fourier, piloté par ordinateur pour une gamme de fréquences comprises entre 400 et 4 000 cm -1 . Les échantillons sont déposés sur pastilles de KBr. Les nombres d'ondes sont exprimés en cm -1 . II.1.1.b. RMN Les spectres de RMN ont été réalisés au service commun de RMN de l’université de Limoges sur un appareil Bruker DPX-400 à une fréquence de 400,13 MHz pour le proton et de 100,62 MHz pour le carbone 13. Les déplacements chimiques δ sont exprimés en ppm ; le tetraméthylsilane étant pris comme référence interne (δ = 0 ppm). Les constantes de couplages J sont exprimées en Hz. Les abréviations retenues sont : s (singulet), sél. (singulet élargi), d (doublet), dd (double doublet), t (triplet), dt (double triplet), tap (triplet apparent), dtap (double triplet apparent), ddd (double double doublet), m (multiplet). 156
II.1.1.c. Ultraviolet-Visible Les densités optiques des dosages colorimétriques sont mesurées sur un spectrophotomètre UV-visible à double faisceau Shimadzu UV-1700 series. Elles sont effectuées dans des cellules en polystyrène (PS) de 1 cm de trajet optique. Les spectres des phtalocyanines et des porphyrines synthétisées ont été réalisés sur un spectrophotomètre UV- visible Perkin Elmer Lamba 25 dans des cellules de quartz de 1 cm de trajet optique à une concentration voisine de 10 -5 -10 -6 M dans l’eau. Les longueurs d’onde correspondantes aux absorbances maximales sont exprimées en nm et les coefficients d’absorption molaire ε, en mol -1 .L.cm -1 . II.1.1.d. Spectrométrie de masse MALDI-TOF Les spectres de masse MALDI-TOF des oligosaccharides ont été réalisés à la plateforme de spectrométrie de masse de l’INRA de Nantes (UR 1268 BIA). Les échantillons hydrolysés ont été dissous dans l’eau à une concentration de 0,1 mg.L -1 . Les mesures ont été réalisées sur un spectromètre MALDI-LR (Waters, Manchester, UK) dont le laser émet dans l’UV à 337 nm (fréquence 5 HZ) pour dessorber et ioniser un mélange de matrice/échantillon co-cristallisé sur une surface métallique. La matrice utilisée est l’acide 2,5- dihydroxybenzoique (DHB), dissoute à 5 mg.mL -1 dans 0,1% de TFA. Les spectres de masse MALDI-TOF des porphyrines et des phtalocyanines ont été effectués au Laboratoire de Chimie Structurale Organique et Biologique de l’Université de Paris VI par le Dr. Sandra Alves par désorption laser avec un spectromètre à temps de vol Voyager Elite. II.1.2. Chromatographie II.1.2.a. Chromatographie sur couche mince Des plaques de silice Kieselgel 60F254 de 0,2 mm d'épaisseur (Merck) ont été employées pour la chromatographie sur couche mince en phase normale. Dans le cas des oligosaccharides, une double migration est réalisée dans le système de solvants ternaire (butanol, acide acétique, eau ; 2/1/1). Après évaporation de l'éluant, les plaques sont pulvérisées par une solution d’orcinol sulfurique (0,1 % d’orcinol dans de l’acide sulfurique à 20 %). Elles sont enfin placées 10 minutes à l'étuve à 100°C pour être révélées. 157
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UNIVERSITE DE LIMOGES Ecole Doctora
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Remerciements Je remercie tout d’
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Enfin, je remercie mes proches. Mer
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- La lignine-peroxydase (LiP) La li
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En matière de délignification, la
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Xylane O OR R= Xylane OR OR O OH OH
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Ionisation par MALDI Le MALDI (Matr
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Gestion, évolution et coût du pro
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Détails 213 Nombre d'unités Coût
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l’anticipation et de la concertat
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