caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Exposé bibliographique : La O-fucosyltransférase 1
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que l'activité O-fucosyltransférase 1 est co-localisée avec l'activité de la Glucose-6-
phosphatase, une enzyme réticulaire soluble, et non avec l'activité de l'enzyme β4Gal-T1. Ces
résultats suggèrent fortement que Pofut1 est une enzyme soluble probablement localisée dans
la lumière du RE. Pour confirmer ces observations, des expériences d'immunolocalisation ont
été conduites sur des cellules COS-1 exprimant la protéine recombinante humaine POFUT1
étiquetée avec 6 histidines (His6) (Fig.15A. et D.)(Luo et Haltiwanger, 2005). Les auteurs
démontrent que POFUT1 est co-localisée avec la calréticuline (Fig.15C.), protéine
chaperonne du RE, et non avec GM130 (Fig.15F.), enzyme de l'appareil de Golgi.
Figure 15 : Immunolocalisation de la protéine recombinante POFUT1 humaine dans les cellules
COS-1.
Le marquage de l’enzyme POFUT1 est réalisé à l’aide d’un anticorps anti-His6. A et D, la protéine POFUT1 est
détectée dans le RE; B, la calréticuline est détectée dans le RE; E, GM130 est détecté dans le Cis-Golgi; C,
superposition des images A et B; F, superposition des images D et E. Extrait de Luo et Haltiwanger, 2005.
Lors de cette même étude, une analyse bioinformatique des séquences protéiques des
enzymes Pofut1 humaine, murine et de drosophile, grâce au logiciel SMART
(http://smart.embl-heidelberg.de/), montre que la partie N-terminale des enzymes ne contient
pas de domaine transmembranaire, mais un peptide signal permettant l'entrée des protéines
dans le RE (Luo et Haltiwanger, 2005). De plus, la comparaison de ces 3 orthologues révèle la
présence d'une séquence KDEL-like (respectivement RDEF, RDEF et HEEL) à l’extrémité C-
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