caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Exposé bibliographique : La O-glycosylation
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Ces domaines sont caractérisés par la présence de six résidus cystéines formant trois ponts
disulfures impliqués dans le maintien de leur conformation tridimensionnelle. Bien que les
boucles peptidiques créées par les ponts disulfures soient plus petites dans les domaines EGFlike
que dans les domaines EGF, ils n’en possèdent pas moins une conformation similaire.
Dans la suite du manuscrit et pour ne pas alourdir inutilement le texte, nous emploierons
uniquement le terme EGF pour désigner ces deux types de domaines.
Le O-glucosylglycane complet (Xylα1,3Xylα1,3Glcβ1-S/T) et des formes
intermédiaires (Xylα1,3Glcβ1-S/T et Glcβ1-S/T) ont été trouvés sur des domaines EGF de
nombreuses protéines. Initialement identifiés sur les facteurs de coagulation VII et IX bovin
(Hase et al., 1988), ces O-glycanes ont ensuite été découverts sur la protéine Z humaine
impliquée dans la fécondation (Nishimura et al., 1989), le récepteur Notch et ses ligands
(Moloney, Shair et al., 2000) impliqués dans de nombreux processus développementaux, et la
thrombospondine, notamment impliquée dans l’adhésion et l’agrégation plaquettaire
(Nishimura, Yamashita et al., 1992).
La comparaison des sites de liaison du O-glucose sur ces diverses protéines a permis
d’identifier un motif consensus de O-glucosylation. Le glucose est directement fixé sur le
groupement hydroxyle d’un résidu sérine ou thréonine appartenant au motif, C 1 XS/TXPC 2 , où
C 1 et C 2 sont la première et la deuxième cystéines conservées d’un domaine EGF.
Une forte activité O-glucosyltransférase a été mise en évidence dans des extraits
protéiques de cellules CHO (Shao et al., 2002), ceci grâce à des tests d’activité enzymatique
in vitro, utilisant de l’UDP-glucose radiomarqué comme substrat donneur et le premier
domaine EGF du facteur de coagulation VII humain comme substrat accepteur. Une telle
activité est également présente dans diverses lignées cellulaires comme SF9 (cellules
d’insectes), HD11 (macrophages de poulet), NIH 3T3 (fibroblastes d’embryon murin) et
HELA (Shao et al., 2002). Aucune activité O-glucosyltransférase n’a été trouvée chez la
levure. Pour l’instant, chez les Animaux, la ou les enzyme(s) responsable(s) de ce type de
greffage ne sont pas encore identifiées, contrairement aux Végétaux où plusieurs Oglucosyltransférases
ont été caractérisées (Veach et al., 2003).
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