caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...
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caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

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10.08.2013 Views

Conclusion et perspectives __________________________________________________________________________________________ > La première consiste à étudier l’expression des principaux gènes de la glycosylation au cours de la différenciation des cellules musculaires de la lignée murine C2C12. Cette approche repose sur la mise en place et l’utilisation de la technologie TaqMAn Low Density micro-Array (TLDA), qui autorise l’analyse simultanée par PCR en temps réel, des niveaux d’expression de plusieurs centaines de gènes de la glycosylation. Cette analyse permettra de déterminer les principaux gènes qui influencent le déroulement du programme myogénique chez la souris. Sur les 375 gènes de la glycosylation analysés (ce qui représente une analyse transcriptomique de plus de 70% du "glycogénome"), les ¾ environ sont exprimés et 17% présentent des variations (d'un facteur supérieur ou égal à 4) de leurs quantités de transcrits au cours de la cinétique de différenciation. Quand les cellules C2C12 surexpriment Pofut1, 40 gènes de la glycosylation ont une expression différente par rapport à celle observée dans les cellules témoins. Les gènes exprimés différemment correspondraient à des gènes dont la régulation pourrait être dépendante d’un réseau moléculaire incluant potentiellement l’enzyme Pofut1. > La deuxième, qui repose également sur la technologie TLDA consiste en l’étude des niveaux d’expression de gènes codant des protéines O-fucosylables (Notch et ses ligands, Cripto, etc.), des protéines impliquées dans les voies de signalisation de Notch (CBF1), les glycosyltransférases impliquées dans l’élongation du O-fucose lié (Fringes, β4- galactosyltransférase 1) ou encore des protéines intervenant dans la régulation de la myogenèse (Wnts, BMP, TGFβ). Cette étude, conduite en parallèle sur les cellules surexprimant Pofut1 et les cellules témoins est actuellement en cours. Jusqu’ici, c’est l’analyse des conséquences de la surexpression de Pofut1 que nous avons entrepris. Des études similaires où le gène Pofut1 est sous-exprimé débuteront prochainement. Des tests préliminaires avec le vecteur de shRNA dont nous disposons montrent que celui-ci est fonctionnel puisque 24 heures après transfection des cellules C2C12, l’expression des transcrits Pofut1 est diminuée d’un facteur 3 par rapport à celle des cellules non transfectées. Les résultats obtenus dans le cadre de ce travail de thèse apportent de nouvelles connaissances sur la O-fucosylation en général et sur les gènes de O-fucosyltransférases en particulier. Une étude préliminaire a par ailleurs ouvert une nouvelle voie de recherche visant à comprendre le rôle de l’enzyme Pofut1, au cours d’un processus développemental complexe, la Myogenèse. 228

Nouveau chapitre de la thèse Mentor : Jacques Christen 229

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