caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Conclusion et perspectives
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> La première consiste à étudier l’expression des principaux gènes de la glycosylation au
cours de la différenciation des cellules musculaires de la lignée murine C2C12. Cette
approche repose sur la mise en place et l’utilisation de la technologie TaqMAn Low Density
micro-Array (TLDA), qui autorise l’analyse simultanée par PCR en temps réel, des niveaux
d’expression de plusieurs centaines de gènes de la glycosylation. Cette analyse permettra de
déterminer les principaux gènes qui influencent le déroulement du programme myogénique
chez la souris. Sur les 375 gènes de la glycosylation analysés (ce qui représente une analyse
transcriptomique de plus de 70% du "glycogénome"), les ¾ environ sont exprimés et 17%
présentent des variations (d'un facteur supérieur ou égal à 4) de leurs quantités de transcrits au
cours de la cinétique de différenciation. Quand les cellules C2C12 surexpriment Pofut1, 40
gènes de la glycosylation ont une expression différente par rapport à celle observée dans les
cellules témoins. Les gènes exprimés différemment correspondraient à des gènes dont la
régulation pourrait être dépendante d’un réseau moléculaire incluant potentiellement l’enzyme
Pofut1.
> La deuxième, qui repose également sur la technologie TLDA consiste en l’étude des
niveaux d’expression de gènes codant des protéines O-fucosylables (Notch et ses ligands,
Cripto, etc.), des protéines impliquées dans les voies de signalisation de Notch (CBF1), les
glycosyltransférases impliquées dans l’élongation du O-fucose lié (Fringes, β4-
galactosyltransférase 1) ou encore des protéines intervenant dans la régulation de la
myogenèse (Wnts, BMP, TGFβ). Cette étude, conduite en parallèle sur les cellules
surexprimant Pofut1 et les cellules témoins est actuellement en cours.
Jusqu’ici, c’est l’analyse des conséquences de la surexpression de Pofut1 que nous avons
entrepris. Des études similaires où le gène Pofut1 est sous-exprimé débuteront prochainement.
Des tests préliminaires avec le vecteur de shRNA dont nous disposons montrent que celui-ci
est fonctionnel puisque 24 heures après transfection des cellules C2C12, l’expression des
transcrits Pofut1 est diminuée d’un facteur 3 par rapport à celle des cellules non transfectées.
Les résultats obtenus dans le cadre de ce travail de thèse apportent de nouvelles
connaissances sur la O-fucosylation en général et sur les gènes de O-fucosyltransférases en
particulier. Une étude préliminaire a par ailleurs ouvert une nouvelle voie de recherche visant
à comprendre le rôle de l’enzyme Pofut1, au cours d’un processus développemental
complexe, la Myogenèse.
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