caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Conclusion et perspectives
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Etant donné les nombreuses difficultés rencontrées pour transfecter efficacement les
cellules bovines en culture primaire, leur utilisation a été retardée. Ainsi, nous avons décidé
d’opérer les modulations d’expression de Pofut1 sur la lignée cellulaire murine. Ce volet de
recherche se poursuit à l’heure actuelle au sein de notre équipe. La transfection des cellules
C2C12 avec un vecteur de surexpression contenant l’ORF du gène murin Pofut1, semble
entraîner un retard dans le processus de différenciation myogénique. En effet, durant les 72
premières heures après induction de la différenciation, les profils d’expression des facteurs
bHLH dans les cellules surexprimant Pofut1 sont retardés par rapport aux cellules témoins.
Quand l’expression de Pofut1 revient à un niveau basal, ces facteurs sont de nouveau
exprimés et ce, de façon beaucoup plus importante que dans des cellules témoins. Ces
résultats peuvent être rapprochés de ce qui est connu à l’heure actuelle du rôle des récepteurs
Notch. En effet, nous savons que les interactions entre Notch et ses ligands ayant lieu dans la
matrice extracellulaire sont modulées par leur état de O-fucosylation. Au cours de la
myogenèse, le récepteur Notch a pour fonction principale de maintenir un pool de cellules
dans un état indifférencié. Il est donc envisageable qu’une surexpression de Pofut1 dans les
myoblastes provoque une hyper-activation du récepteur Notch, empêchant ainsi les cellules
transfectées de se différencier. Quand le niveau d’expression de Pofut1 retrouve son niveau
basal, les cellules sont de nouveau engagées dans une voie de différenciation myogénique et
expriment de fortes quantités de facteurs bHLH, afin de fusionner avec les myotubes
préexistants. Ceci est en accord avec les niveaux d’expression des transcrits CD34. En effet,
les cellules transfectées expriment plus longtemps ce marqueur, en relation avec le maintien
de l'état non fusionné des myoblastes.
Des expériences complémentaires sont évidemment nécessaires pour enrichir ces
résultats. Ainsi, il est envisagé de vérifier par western blot le niveau d’expression de la
protéine Pofut1 au cours des cinétiques de différenciation. De même, il serait prudent de
confirmer, à l’aide d’anticorps commerciaux dirigés contre les facteurs bHLH, les différences
d’expression constatées au niveau transcriptionnel.
La O-fucosylation n’est pas la seule modification post-traductionnelle qui jouerait
potentiellement un rôle dan la différenciation de cellules musculaires. Ainsi, deux autres
approches dites « globales » sont actuellement développées au sein de l’équipe.
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