caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Conclusion et perspectives
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masse moléculaire ne résulte pas de la traduction de l’un des variants transcriptionnels mis en
évidence et serait sans doute le résultat d’un clivage protéolytique spécifique des tissus
musculaires. Tout comme pour Pofut1, la forme active de l’enzyme Pofut2 est absente des
muscles squelettiques adultes. Dans ces tissus, l’anticorps anti-Pofut2 détecte une forme de
très haute masse moléculaire, environ 100 KDa, comparée à la protéine Pofut2A active
triglycosylée (~50 KDa). Ce marquage, qui ne peut correspondre à la traduction d’aucun des
variants transcriptionnels caractérisés, est sans doute le résultat d’associations protéiques
résistantes aux conditions dénaturantes de l’électrophorèse. Les marquages anti-Pofut1 et anti-
Pofut2 donnent des résultats similaires en utilisant des tissus d’autres espèces (souris et porc).
Les spécificités des anticorps étant affirmées, il devient intéressant d’identifier les protéines
révélées dans les muscles squelettiques adultes. Les expériences d’immunoprécipitation
réalisées avec l’anticorps anti-Pofut1 sur des extraits protéiques de lysats cellulaires de
muscles bovins n’ont donné, pour l’instant, aucun résultat, sans doute dû à la faible expression
de ces protéines. Il devient dans ces conditions nécessaire de mettre au point une technique
d’extraction protéique qui exclut les protéines contractiles, ce qui à terme favorise
l’interaction des anticorps avec leurs cibles. De plus, jusqu'à présent, les expériences
d’immunoprécipitation ont été effectuées avec des anticorps (anti-Pofut1) en suspension. La
construction de colonnes de chromatographie d’affinité avec les anticorps polyclonaux anti-
Pofut1 et anti-Pofut2 greffés doit être envisagée pour améliorer l’immunoprécipitation. Les
protéines ainsi purifiées devront être séparées par électrophorèse sur un gel dénaturant à 1 ou
2 dimensions, puis identifiées grâce à une analyse en spectrométrie de masse.
Les variants transcriptionnels, Pofut1b à Pofut1e et Pofut2b à Pofut2e, ne sont pas
homologues à ceux décrits chez d’autres espèces Animales. Ils ont été mis en évidence de
façon indépendante à la suite de différentes expériences de RT-PCR, effectuées sur plusieurs
tissus provenant de trois adultes et trois embryons bovins de race Charolaise. On peut donc
penser qu’ils ne résultent pas d’artéfacts de manipulation. Ces transcrits, qui ne semblent pas
être traduits in vivo pourraient avoir des rôles importants au sein des cellules. En effet, il est
désormais connu que plusieurs types d’ARN (ARN, ARNt, ARNr) ne codent pas pour des
protéines, ce sont les ARN non codants ou ARNnc (Eddy, 2001). Plusieurs formes d’ARNnc
ont été récemment découvertes sans pour autant que leurs rôles ne soient déterminés. Ils
pourraient, par exemple, participer à la régulation du niveau d’expression des protéines
codées par les gènes à partir desquels ils sont transcrits (Larreau et al., 2004).
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