caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Conclusion et perspectives
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La structure du gène Pofut1 bovin, localisé sur le chromosome 13, comporte au moins
10 exons répartis sur au moins 39,4 Kb, alors que les gènes homologues humain et murin
comportent respectivement 8 et 7 exons, répartis sur au moins 30,8 et 24,5 Kb. La structure du
gène Pofut2 bovin, dont la localisation chromosomique est encore indéterminée, comporte au
moins 9 exons, répartis sur au moins 13,9 Kb. Le gène homologue murin qui comporte le
même nombre d’exons s’étend sur 10,3 Kb, alors que le gène humain constitué de 10 exons
est long de plus de 24 Kb. Si on ne tient compte que des exons codant les formes actives de
Pofut1 et Pofut2, le découpage exon/intron est conservé chez toutes les espèces de Vertébrés
étudiées à ce jour. La présence des gènes Pofut1 et Pofut2, en une seule copie, dans les
génomes d’un très grand nombre d’espèces (Vertébrés et Invertébrés) suggère un rôle
fondamental de la O-fucosylation. Une étude phylogénétique, sur des séquences complètes de
Pofut appartenant à des espèces recouvrant une diversité significative du monde Animal,
révèle que les gènes ancestraux Pofut1 et Pofut2 étaient très probablement des gènes
morcelés, déjà présents chez l’ancêtre des Bilatériens. Pour les deux gènes, les positions
introniques les plus conservées sont situées en 5’ du gène (position de l’intron 1 pour Pofut1
et positions des introns 2 et 3 pour Pofut2). Ce résultat n’est pas surprenant. En effet, les
régions régulatrices d’un gène ne sont pas seulement situées dans la région promotrice en
5’UTR, on trouve fréquemment des sites de fixation à de nombreux facteurs de régulation de
l’expression génique dans les premiers introns d’un gène, spécialement dans l’intron 1 (Hu et
Leung, 2006). Il est donc logique que de la position de tels introns soit conservée au cours de
l’évolution.
Dans les tissus bovins adultes analysés, seul un variant transcriptionnel de Pofut1
(Pofut1a) et quatre des variants de Pofut2 (Pofut2a, b, d et e) sont présents de façon
ubiquitaire. La répartition des variants de Pofut1 est plus large dans les tissus embryonnaires,
ce qui suggère que leur rôle potentiel est plus important à un stade du développement où les
récepteurs de la famille Notch sont très actifs (Shi et Stanley, 2006). Parmi tous les variants
transcriptionnels mis en évidence, seuls les variants Pofut1a et Pofut2a codent des protéines
ayant des activités O-fucosyltransférases (l’activité de Pofut2B n’étant pas significative in
vitro). Des analyses par western blot de l’expression des protéines Pofut, dans 13 tissus
adultes et 8 tissus provenant d’embryons bovins, révèlent la présence des protéines codées par
ces deux variants dans tous les tissus à l’exception des muscles squelettiques adultes. En effet,
l’anticorps anti-Pofut1 n’y révèle qu’une protéine d’environ 32 KDa (et 36 KDa pour
l’onglet) contre 45 KDa pour la forme active Pofut1A diglycosylée. Cette protéine de faible
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